人上皮性卵巢癌細胞中CD133和CD44的表達狀況及其功能研究.pdf

1、研究背景和目的：腫瘤干細胞(cancer stem cells，CSC)理論認為只有存在于腫瘤中的少量干細胞性質(zhì)的細胞群體對腫瘤發(fā)生和發(fā)展起著決定作用，這一理論的提出為腫瘤研究提供了新的方向，對腫瘤的早期診斷、等級評估及預后都有重要意義，為臨床上徹底治愈腫瘤帶來希望。卵巢癌嚴重危害女性健康，研究卵巢癌尤其是上皮性卵巢癌的有效治療方法具有重大意義，腫瘤干細胞理論的提出為卵巢癌的早期診斷和徹底治療提供了新的思路。CSC分離的關(guān)鍵問題是尋找合

2、適的表面標記，本實驗旨在探討人上皮性卵巢癌細胞中CD133和CD44的表達狀況及其對自我更新、分化增殖能力的影響。 材料和方法： 1.本研究所選用的卵巢癌組織標本均取自山東大學齊魯醫(yī)院婦產(chǎn)科2007年5月至2007年11月間手術(shù)切除并經(jīng)病理證實為上皮性卵巢癌的標本，同時術(shù)中采集腹水分離培養(yǎng)原代細胞。上皮性卵巢癌細胞株SKOV3、3AO、A2780、OVCR3均來自山東大學齊魯醫(yī)院腫瘤中心中心實驗室。 2.流式細胞

3、術(shù)檢測CD133和CD44在SKOV3、3AO、A2780、OVCR3和原代培養(yǎng)細胞中的表達率。 3.免疫組織化學染色檢測卵巢癌組織標本中CDl33和CD44分布情況。 4.免疫磁珠法(magnetic beads cell sorting，MACS)分選出SKOV3細胞中CDl33+細胞。 5.CD133+細胞自我更新、分化增殖能力檢測：用含20％新生牛血清(neonatalboyine serum，NBS)的

4、培養(yǎng)液培養(yǎng)CD133+細胞，于分離后即刻、培養(yǎng)第3天、培養(yǎng)第5天三個時間點用流式細胞術(shù)檢測其中CD133+。細胞所占的比例。 6.統(tǒng)計學方法：數(shù)據(jù)分析采用sPSS13.0軟件，多重均數(shù)之間比較采用單因素方差分析，兩組均數(shù)比較用獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果： 1.原代培養(yǎng)細胞生長狀況顯微鏡下觀察細胞形態(tài)扁平，較為規(guī)整，呈多角形，第一代細胞?；祀s有非腫瘤細胞，一般傳至第二代以后非腫瘤細胞少見，細

5、胞之間相互銜接緊密排列。細胞每7天傳代一次。 2.流式細胞術(shù)檢測CD133和CD44的表達率SKOV3、A2780、3AO、OVCR3中CD133的表達率分別為0.72％±0.10％、0.94％±0.22％、0.81％±0.50％、0.77％±0.28％，四種細胞系間CD133的表達率無顯著性差異(P=0.85)。SKOV3中CD44的表達率為96.92％±1.74％，而A2780、3AO、OVCR3中均為檢測到CD44的表達。

6、原代培養(yǎng)細胞中CD133的表達率，第Ⅲ代培養(yǎng)細胞共檢測了6例，其表達率為1.27％±0.54％；第1代細胞檢測6例，其表達率為0.47％±0.13％。第Ⅲ代細胞CD133表達率高于第1代細胞(P=0.002)；與細胞系比較，第Ⅲ代細胞CD133表達率高于SKOV3(P=0.046)，與A2780、3AO、OVCR3差別無統(tǒng)計學意義。第Ⅲ代培養(yǎng)細胞中CD44的表達率為79.48％±13.21％，第Ⅰ代細胞為93.42％±0.65％。第Ⅲ代

7、細胞CD44表達率低于第Ⅰ代細胞(P=0.049)；第Ⅲ代細胞CD44表達率亦低于SKOV3細胞中CD44表達率(P=0.002)。由于原代培養(yǎng)細胞檢測例數(shù)少，未發(fā)現(xiàn)CD133、CD44表達率與患者的病理類型、分化程度等臨床指標之間的關(guān)系。 3.免疫組織化學染色結(jié)果DAB陽性染色為棕黃色，所檢測的12例卵巢癌組織標本中CD133和CD44均呈陽性，且分布廣泛。 4.CD133+細胞自我更新、分化增殖能力檢測觀察CDl33

8、+細胞生長狀況，其生長速度快于CDl33-細胞(具體數(shù)據(jù)未檢測)，分離后即刻、培養(yǎng)第3天、培養(yǎng)第5天流式細胞術(shù)所測CD133+細胞所占的比例分別為76.74％、11.9l％、2.26％，明顯呈下降趨勢。 結(jié)論： 1.本研究發(fā)現(xiàn)CD133在0.16％～2.05％的上皮性卵巢癌細胞中表達，CD133+細胞有自我更新能力，能夠產(chǎn)生大量CDl33-細胞，具有腫瘤干細胞特征，表明CD133可以作為上皮性卵巢癌腫瘤干細胞的表面標記進