孔雀石綠在草魚體內(nèi)的代謝及殘留研究.pdf

1、孔雀石綠(MG)是一種合成的三苯甲烷類工業(yè)染料，由于其抗菌效果好，價格便宜，容易獲得，曾被廣泛地用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中。但是由于其具有潛在的致癌作用，已經(jīng)被許多國家列為禁用藥。目前，孔雀石綠被非法用于水產(chǎn)品的養(yǎng)殖和運輸過程中的現(xiàn)象仍有存在，因此，加強對該藥的檢測監(jiān)管，優(yōu)化其檢測方法，研究其在主要水產(chǎn)品中的代謝規(guī)律勢在必行。 本研究依據(jù)孔雀石綠(MG)和隱色孔雀石綠(LMG)的理化性質(zhì)，建立了高效液相色譜可見光檢測法(HPLC-VIS)和

2、高效液相色譜紫外光檢測法(HPLC-UV)，前一種方法是加柱后氧化柱，將隱色孔雀石綠氧化為孔雀石綠，利用其洗脫時間不同，從而同時檢測兩種物質(zhì)；后一種方法對隱色孔雀石綠的檢測非常靈敏，且不用氧化柱，流動相可用甲醇，操作過程簡單且節(jié)約成本。 在檢測草魚肌肉樣品時，用HPLC-VIS檢測法，MG和LMG的外標法線性方程分別為：y=150986x-389.38和y=67995x-175.77，相關(guān)系數(shù)分別為：0.9995和0.9993，

3、線性范圍：0.001～0.1mg/kg；用HPLC-UV檢測法，MG和LMG的外標法線性方程分別為：y=57138x-3786.4和y=179901x-1199.7，相關(guān)系數(shù)分別為：0.9927和0.9998，線性范圍分別為：0.01～0.1mg/kg和0.001～0.1mg/kg。 在檢測草魚血液樣品時，用HPLC-VIS檢測法，MG和LMG的外標法線性方程分別為：y=139259x-182.99和y=60093x-149.9

4、7，相關(guān)系數(shù)分別為：0.9991和0.9996，線性范圍：0.005～0.5 mg/kg：用HPLC-UV檢測法，MG和LMG的外標法線性方程分別為：y=56401x-3825.3和y=181863x-981.91，相關(guān)系數(shù)分別為：0.9903和0.9985，線性范圍分別為：0.05～0.5 mg/kg和0.005～0.5 mg/kg?？傊瓾PLC-VIS檢測法對MG和LMG都有較強的檢測靈敏性，HPLC-UV檢測法對LMG的檢測靈敏度

5、高。 本研究優(yōu)化了草魚肌肉和血液樣品的前處理方法，采用乙腈提取，二氯甲烷反萃取凈化和離心除脂，35℃減壓旋蒸濃縮的方法。此方法操作簡便，在對肌肉樣品和血液樣品進行處理后檢測，HPLC-VIS檢測法中孔雀石綠的相對回收率范圍在79.66％～98.341％之間，隱色孔雀石綠的相對回收率范圍在75.150％～103.6435％之間：HPLC-UV檢測法中孔雀石綠的相對回收率范圍在68.1355％～99.6754％之間，隱色孔雀石綠的相

6、對回收率范圍在76.1725％～97.0892％之間。符合《獸藥殘留試驗技術(shù)規(guī)范(試行)》的規(guī)定，該方法的回收率在60％～93％之間，符合殘留檢測的要求。對草魚肌肉和血液樣品的HPLC-VIS和HPLC-UV檢測法所測得的日內(nèi)精密度均小于3，日間精密度均小于8，能夠滿足檢測要求。本研究先用HPLC-UV檢測法研究了肌注孔雀石綠后，草魚血液中孔雀石綠和隱色孔雀石綠的代謝規(guī)律。發(fā)現(xiàn)草魚在注射孔雀石綠15分鐘后，在血液中可同時檢測到孔雀石綠和

7、隱色孔雀石綠?？兹甘G在血液中濃度遠遠高于注射濃度，表明其在魚體內(nèi)吸收、分布、代謝都很迅速，并且可在體內(nèi)蓄積。在用藥15分鐘后草魚血液中隱色孔雀石綠的濃度就達到0.54mg/kg，2小時后其濃度比孔雀石綠高，其消除時間比孔雀石綠長，3天時其在血液中的濃度仍然達到0.51mg/kg。在268nm的檢測波長下未見到其他明顯的代謝產(chǎn)物，可以初步判定隱色孔雀石綠是孔雀石綠在草魚體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物。 模擬生產(chǎn)實踐中常用的用藥方式：0.3

8、mg/kg的MG藥浴1小時后，檢測孔雀石綠在草魚肌肉和血液中的時間-濃度變化。肌肉組織和血液中MG的峰濃度Cmax分別達到1.80318mg/kg和1.37742mg/kg,遠遠高于用藥濃度，與注射用藥結(jié)果相同，表明MG在水產(chǎn)品肌肉和血液組織中都有蓄積作用。孔雀石綠在草魚肌肉和血液中的吸收半衰期T1/2分別為：2.74999小時和1.93770小時，分布半衰期T2/2分別為：0.20468小時和0.17945小時，消除半衰期。T3/2分

9、別為：100.38503小時和46.03478小時，表明孔雀石綠具有較強的血管外分布能力，孔雀石綠在草魚肌肉和血液組織中的吸收分布快，但消除較慢?？兹甘G在草魚肌肉和血液中持續(xù)了30天，隱色孔雀石綠在草魚血液和肌肉中分別持續(xù)了45天和70天。本研究中草魚在0.3 mg/kg的MG中藥浴1小時后，其肌肉和血液中LMG的濃度分別達到：0.006 mg/kg和0.0053 mg/kg。因此LMG完全可以做為草魚體內(nèi)的殘留標示物。HPLV-UV