荷斯坦奶牛FSHR基因5’側(cè)翼和第10外顯子多態(tài)性及其與超數(shù)排卵關(guān)系的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)將FSHR基因作為繁殖性狀的候選基因，對(duì)其5’側(cè)翼調(diào)控區(qū)和第10外顯子進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序、序列比較和PCR-SSCP檢測(cè)，研究該基因在荷斯坦奶牛不同個(gè)體之間的差異以及基因多態(tài)性與奶牛超數(shù)排卵處理效果的關(guān)系，為進(jìn)一步優(yōu)化荷斯坦奶牛超數(shù)排卵技術(shù)和提高可用胚胎數(shù)提供分子水平的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1．根據(jù)GenBank報(bào)道的山羊FSHR 5’側(cè)翼及牛FS[IR第10外顯子序列設(shè)計(jì)引物，以荷斯坦奶牛、沼澤型水牛和河流型水牛的基因組為模

2、板，應(yīng)用PCR技術(shù)，克隆和測(cè)定了FSHR基因5’側(cè)翼和第10外顯子序列。序列比較分析結(jié)果表明，F(xiàn)SHR基因5’側(cè)翼序列長(zhǎng)度在三個(gè)牛品種之間存在差異，其中荷斯坦奶牛為961bp，沼澤型水牛為963bp，河流型水牛為964bp，這種差異主要來自堿基插入/缺失的數(shù)目差異。以荷斯坦奶牛序列為準(zhǔn)，沼澤型水牛發(fā)生了32個(gè)堿基變異、1個(gè)堿基缺失及3個(gè)堿基插入；河流型水牛發(fā)生了24個(gè)堿基變異和3個(gè)堿基插入，而序列同源性為98.9％的沼澤型水牛與河流型水

3、牛發(fā)生了10個(gè)堿基突變和1個(gè)堿基缺失。 FSHR基因第10外顯子的序列長(zhǎng)度均為1234bp。沼澤型水牛和河流型水牛與荷斯坦奶牛序列相比，同源性分別為99.1％和98.7％，分別有11處和15處堿基變異，其中5處引起氨基酸改變；而序列同源性高達(dá)99.5％的沼澤型水牛與河流型水牛發(fā)生了6個(gè)堿基突變，引起1處氨基酸密碼改變。 2.采用PCR-SSCP技術(shù)對(duì)荷斯坦奶牛FSHR基因5’側(cè)翼和第10外顯子進(jìn)行多態(tài)性分析。結(jié)果表明：在

4、所劃分的9個(gè)片段上，發(fā)現(xiàn)5-1、10-3及10-5片段存在多態(tài)，且群體多態(tài)信息含量均達(dá)到了中度多態(tài)(0.5>PIC>0.25)。 (1)5-1片段中出現(xiàn)從，BB和AB三種基因型，測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)BB基因型相對(duì)于AA基因型分別在第一692位、-667位、-585位和-550位序列處產(chǎn)生A→G、C→G、C→T和C→T堿基突變；統(tǒng)計(jì)表明優(yōu)勢(shì)基因型為從型，基因型頻率0.50，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)锳，基因頻率為0.625；X2檢驗(yàn)表明，荷斯坦奶牛X

5、2=6.3973，X0.05

6、斯坦奶牛X2=0.2005，X20.05，差異不顯著，群體處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。 (3)10-3片段中也出現(xiàn)AA，BB和AB三種基因型，測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)10-3片段中船基因型相對(duì)于AA基因型，分別在第1974位、2008位和2056位序列處產(chǎn)生C→G、C→T和A→C堿基突變；統(tǒng)計(jì)表明優(yōu)勢(shì)基因型為BB型，基因型頻率0.58，優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)锽，基因頻率為0.736；X2檢驗(yàn)表明，荷斯坦奶牛X2=