用豚鼠感染模型篩選副豬嗜血桿菌弱毒菌株.pdf

1、副豬嗜血桿菌（Hamophilus parasuis, HPS）屬于巴斯德菌科嗜血桿菌屬成員，是豬格拉澤氏病的主要病原菌，至少有15種血清型，主要引起豬的全身性感染，常見的臨床癥狀表現(xiàn)為多發(fā)性纖維素性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎等，給全世界養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟損失。目前主要的防治手段是依靠抗生素和滅活疫苗，但常規(guī)滅活疫苗保護(hù)力不夠、成本高、副反應(yīng)較大，對不同血清型HPS的交叉保護(hù)率也較低，而弱毒活疫苗保護(hù)期長、使用成本較低，并可誘導(dǎo)交叉保護(hù)。因

2、此篩選該菌的弱毒疫苗候選菌株是開發(fā)新型疫苗的有效途徑。
　　本實驗室將HPS在37℃和40℃條件下分別獲得了250代菌株，作為篩選弱毒疫苗的候選菌株。本論文建立了HPS的豚鼠感染模型，并用該模型初步檢測了HPS傳代菌株的毒力。主要研究結(jié)果如下:
　　1.HPS豚鼠感染模型的研究:在本試驗中采用鼻腔感染和腹腔感染兩種接種方式。鼻腔感染試驗中，分為3個劑量組，每組3只豚鼠，分別鼻腔接種副豬嗜血桿菌SH0165菌株6.69×109

3、CFU、2.23×109CFU和5.58×108CFU的菌量;在腹腔感染試驗中，也分3個實驗組，每組6只豚鼠，分別接種的副豬嗜血桿菌SH0165的劑量為4.83×109CFU、1.93×109CFU和4.83×108CFU的菌量。
　　試驗結(jié)果顯示，在鼻腔感染試驗組中，豚鼠感染后幾個小時內(nèi)開始出現(xiàn)精神沉郁、厭食等癥狀，但3d后都恢復(fù)健康，最終3個劑量組的豚鼠都沒有死亡。7d后剖檢觀察豚鼠的組織病變，其中只有6.69×109CFU劑

4、量組的豚鼠能觀察到較為明顯的全身出血癥狀，其他劑量組豚鼠的病變都不明顯。同時各個感染劑量組之間的組織器官病變差異性也難以區(qū)分和量化。在腹腔感染試驗中，豚鼠感染后幾個小時內(nèi)出現(xiàn)精神沉郁、呼吸困難、移動遲緩、食欲廢絕等癥狀，接著出現(xiàn)死亡。最終7d內(nèi)4.83×109CFU劑量組的6只豚鼠死亡了5只，中間劑量組中死亡了2只，而最低劑量組中沒有豚鼠死亡。死亡的豚鼠剖檢后能觀察到比較明顯的敗血癥、纖維素性漿膜炎和胸腹腔積液等臨床癥狀。在組織載菌量測

5、定試驗中，也能在全身主要器官分離到該種病原菌。同時后續(xù)的豚鼠血常規(guī)檢測、血生化鑒定、組織病理切片和HE染色等試驗也進(jìn)一步證明了副豬嗜血桿菌能對豚鼠造成實質(zhì)性的傷害。以上結(jié)果也證明了豚鼠可以作為副豬嗜血桿菌感染的模型動物。在此基礎(chǔ)上建立了關(guān)于豚鼠腹腔感染副豬嗜血桿菌的相關(guān)評價指標(biāo)和方法，用于評估傳代菌株的毒力強弱。
　　2.HPS弱毒菌株的初步篩選:將副豬嗜血桿菌SH0165菌株分別在37℃和40℃條件下連續(xù)液體傳代至200代。而后