靈杞黃斑顆粒對視網(wǎng)膜光損傷的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的：觀察大鼠視網(wǎng)膜光損傷的病理形態(tài)、電生理、生化及凋亡相關(guān)指標(biāo)的改變；探討中藥靈杞黃斑顆粒復(fù)方對大鼠視網(wǎng)膜光損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。 方法：1.建立大鼠視網(wǎng)膜光損傷模型，研究靈杞黃斑顆粒對光損傷大鼠視網(wǎng)膜病理形態(tài)和視功能的保護(hù)作用。采用自制光損傷箱，白色熒光燈，光照強(qiáng)度平均為2800±150Lux，持續(xù)照射5小時建立大鼠視網(wǎng)膜光損傷模型。隨機(jī)分為空白對照組、光損傷給水組和光損傷給藥組。于造模前10天開始給予靈杞黃斑顆?；蛘麴s水

2、灌胃，每日一次，至實驗結(jié)束。光照后7天取眼球行病理切片檢測，HE染色，光照后14天，進(jìn)行視網(wǎng)膜電圖(ERG)的檢測、視網(wǎng)膜病理切片檢測及視網(wǎng)膜外核層計數(shù)；按照上述方法，在光照后3天取眼球進(jìn)行電鏡觀察，在第5天，10天取大鼠眼球，做石蠟切片，進(jìn)行HE染色，觀察形態(tài)改變。2.光照后3天，取眼球進(jìn)行視網(wǎng)膜電鏡檢測，做石蠟切片，進(jìn)行凋亡原位檢測(TUNEL)標(biāo)記細(xì)胞凋亡。3.測定光照后1天各組大鼠視網(wǎng)膜SOD、GSH-Px、CAT活性及MDA含

3、量變化。4.使用高效液相色譜儀測定光照后14天各組視網(wǎng)膜游離氨基酸的變化。5.通過實時熒光定量PCR和免疫蛋白印跡(westernblot)分析大鼠視網(wǎng)膜光損傷凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。6.運用免疫組化方法觀察光照后14天大鼠視網(wǎng)膜GFAP表達(dá)的變化。 結(jié)果：1.成功建立大鼠視網(wǎng)膜光損傷模型，光照后7天和14天HE染色形態(tài)觀察顯示，光損傷給藥組視網(wǎng)膜形態(tài)保存較完整，光照后14天，外核層計數(shù)顯著多于光損傷給水組。光照后14天ER

4、G檢測表明，光損傷給水組大鼠視功能顯著下降，光損傷給藥組a、b波振幅及OPs波總振幅明顯高于光損傷給水組。2.光照后3天電鏡結(jié)果顯示，光損傷給水組視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞欠完整，微絨毛消失，光感受器外段紊亂，斷裂甚至消失，外核層細(xì)胞核固縮，細(xì)胞間隙增寬，呈凋亡形態(tài)改變；而光損傷給藥組形態(tài)相對完好，感受器外段排列相對規(guī)整，外核層有少量空泡變，僅見散在固縮的凋亡細(xì)胞核。TUNEL結(jié)果發(fā)現(xiàn)，光照后3天視網(wǎng)膜外核層出現(xiàn)大量陽性著染細(xì)胞核，而光損傷給藥

5、組僅見散在的少量黃色TUNEL陽性著色的感光細(xì)胞核。3.光照后1天，與光損傷給水組比較，光損傷給藥組大鼠視網(wǎng)膜SOD、GSH-Px、CAT活性顯著增高，MDA含量明顯降低。4.光照后14天，大鼠視網(wǎng)膜天谷氨酸(Glu)、天門冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、?；撬?Tau)、γ-氨基丁酸(GABA)含量增高，與光損傷給水組比較，光損傷給藥組視網(wǎng)膜氨基酸含量顯著降低。5.光照后，光損傷給水組c-fos、caspase-3mRNA和蛋白表

6、達(dá)上調(diào)，顯著高于光損傷給藥組，而bcl-xLmRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)，光損傷給藥組表達(dá)顯著高于給水組。6.光照后14d，光損傷給水組GFAP表達(dá)增高，光損傷給藥組表達(dá)相對較低。 結(jié)論：1.靈杞黃斑顆粒對光損傷大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)、功能具有保護(hù)作用。2.靈杞黃斑顆粒能夠明顯減輕光照引起的視網(wǎng)膜氧化應(yīng)激損傷，發(fā)揮其抗氧化作用；調(diào)控視網(wǎng)膜氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的異常，改善視網(wǎng)膜神經(jīng)組織細(xì)胞的生物循環(huán)與代謝。3.靈杞黃斑顆粒通過下調(diào)c-fos、cas