枸杞多糖對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides，LBP)對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用，并探討其可能的機(jī)制。為青光眼視神經(jīng)的保護(hù)提供新的思路。
　　方法：體外培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞株 RGC-5，應(yīng)用不同濃度（50、100、200、400μmol·L-1） H2O2誘導(dǎo) RGC-5氧化應(yīng)激損傷，終濃度為200μmol·L-1 H2O2作用24h可導(dǎo)致 RGC-5細(xì)胞活性降低為49.6

2、8％，本研究選用此濃度 H2O2建立 RGC-5氧化應(yīng)激損傷模型。不同濃度(10 mg·L-1，20 mg· L-1，40mg·L-1)LBP對 H2O2誘導(dǎo)損傷的 RGC-5干預(yù)24h，通過四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測細(xì)胞存活率，本實(shí)驗(yàn)選用40mg·L-1 LBP進(jìn)行后續(xù)的研究。實(shí)驗(yàn)分為四組，即正常對照組、LBP組、H2O2組和H2O2+LBP組，通過 DAPI染色、AnnexinV-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)觀察 LBP對 H2

3、O2誘導(dǎo) RGC-5細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化以及凋亡率的影響。同時應(yīng)用實(shí)時熒光定量 PCR和western blot檢測大鼠 RGC-5細(xì)胞 c-Myc、caspase3、Bcl-2和Bax的動態(tài)表達(dá)。
　　結(jié)果： H2O2可顯著降低 RGC-5細(xì)胞的存活率，不同濃度 H2O2組細(xì)胞存活率分別為91.33±10.0、87.67±8.78、49.68±7.48、26.50±4.89；H2O2對 RGC-5細(xì)胞的生長抑制率在一定的范圍內(nèi)隨

4、著濃度升高逐漸增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。MTT結(jié)果顯示，不同濃度(10 mg·L-1，20 mg· L-1，40mg·L-1)LBP對 H2O2誘導(dǎo)損傷的 RGC-5干預(yù)后細(xì)胞存活率分別為52.53±10.10、62.88±10.20、68.62±5.39，與 H2O2組的49.68±7.48相比細(xì)胞存活率明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。DAPI染色結(jié)果顯示：H2O2處理后 RGC-5細(xì)胞可見染色質(zhì)凝聚，邊緣

5、化，呈現(xiàn)出顯著細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；40mg·L-1 LBP進(jìn)行干預(yù)后可改善 H2O2所致的細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。Annexin-V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明：正常對照組、LBP組、H2O2組、H2O2+LBP組細(xì)胞凋亡率分別為4.90%、4.25%、32.35%和24.21%。正常對照組、H2O2組、H2O2+LBP組組間比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。實(shí)時熒光定量 PCR以及 Western Blot結(jié)果顯示：與正常對照組

6、比較，H2O2組Caspase-3、c-Myc、Bax mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，而 Bcl-2 mRNA和蛋白水平則明顯下調(diào)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與 H2O2組比較，H2O2+LBP組可明顯抑制 Caspase-3、c-Myc、Bax mRNA和蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)Bcl-2 mRNA和蛋白的表達(dá)(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.枸杞多糖對體外培養(yǎng)的大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用。
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