雙清對糖尿病腎病及微循環(huán)的影響.pdf

1、糖尿病。腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)最為常見而嚴重的微血管并發(fā)癥之一。DM人群的DN發(fā)生率為20％～40％,是患者的主要死因之一。其主要特征是尿蛋白增加和腎小球硬化。
　　 微循環(huán)是指微血管即微動脈和微靜脈之間的血液循環(huán),是血液與組織細胞進行物質(zhì)交換的場所。微循環(huán)血流不暢指微循環(huán)血流流速、血管形態(tài)和功能異常。微循環(huán)障礙與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系

2、。
　　 DN微血管病變時,其血栓素增高,血小板功能亢進,血管收縮,血小板聚集,血液高凝,血流緩慢,以致血流在血管內(nèi)中斷,腎臟的氧氣、養(yǎng)料等不能得到有效運輸,無法傳遞能量,排除廢物,導(dǎo)致DN病情加重,最終發(fā)展為終末期腎病。
　　 雙清的主要成分為決明子、黃精、桑葉、菊花、葛根、山藥、蘆根等。其中的多味中藥均具有顯著的活血化瘀的作用,可有效軟化血管、改善微循環(huán),預(yù)防和治療糖尿病微循環(huán)障礙的發(fā)生。
　　 本實驗第一部

3、分采用單側(cè)腎臟切除加鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)糖尿病腎病大鼠模型,通過灌胃給藥治療,以期證明雙清對早期糖尿病腎病的作用;第二部分通過觀察小鼠給藥后耳廓細血管口徑以及血流速度等的改變,證明雙清對小鼠耳廓微循環(huán)的影響。
　　 第一部分雙清對早期糖尿病腎病作用的研究
　　 目的:觀察雙清對早期糖尿病腎病大鼠血糖升高和腎臟損傷的防治作用。
　　 方法:選取健康雄性Wistar大鼠80只,體重220±20g,除11只作為正常

4、對照組,其余各只大鼠常規(guī)消毒,1％戊巴比妥鈉麻醉后,行左側(cè)腎臟切除術(shù),切除后每只給予1ml注射用青霉素鈉防止感染。兩周后,切除腎臟的大鼠空腹12h后,按50mg/kg腹腔注射1％STZ枸櫞酸緩沖溶液。3天后大鼠空腹12h眼眶取血測血糖,血糖值≥11.1mmol/L作為糖尿病成模大鼠,其余建模不成功者予以剔除。成模大鼠分為5組:陽性對照組灌胃8mg/kg纈沙坦+1mg/kg格列本脲,雙清高(SQ-H)、中(SQ-M)、低(SQ-L)組分別

5、灌胃4g/kg、2g/kg、1g/kg雙清,模型對照組以蒸餾水灌胃。正常對照組亦灌胃給予蒸餾水。各組均按1ml/100g給藥。每日灌胃給藥一次,連續(xù)給藥4周,正常進食飲水。
　　 結(jié)果:
　　 1大鼠狀態(tài)及體重變化:模型對照組大鼠明顯消瘦,多飲、多食、多尿,具有典型的“三多一少”表現(xiàn);大鼠精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,蜷臥拱背,毛發(fā)無光澤。陽性對照組和雙清組大鼠也有類似情況,隨著給藥時間增加,狀態(tài)略有好轉(zhuǎn)。正常對照組大鼠狀態(tài)良好。

6、
　　 實驗開始時,各組隨機分配,體重均無顯著性差異;實驗結(jié)束時,正常組(321±23)、陽性藥組(298±49)和雙清高劑量組(279±46)體重均明顯高于模型組(225±37)(P＜0.05)。
　　 2血糖變化:給藥4周后,模型對照組血糖值(35.2±10.9)顯著高于正常對照組(4.34±0.7,P＜0.05),雙清高、中、低劑量組血糖值分別為16.3±5.4、17.0±9.6、19.2±7.8,陽性對照組血糖值

7、為6.5±2.2,與模型對照組比較均明顯降低(P＜0.05)。
　　 3腎臟指標:給藥4周后,模型對照組(0.64±0.07)的腎體比明顯高于正常對照組(0.25±0.04,P＜0.05),與陽性對照組(0.46±0.09)和雙清高劑量組(0.51±0.06)的。腎體比比較也明顯偏高(P＜0.05);模型組大鼠的24h尿蛋白(227±47)含量與正常對照組(32±12)比較有顯著性差異(P＜0.05),也明顯高于陽性藥組(31±

8、12)和雙清高(120±47)、中(83±63)劑量組的大鼠24h尿蛋白(P＜0.05);血清中,模型對照組(12.0±2.1)的尿素氮(BUN)高于正常對照組(6.0±2.1,P＜0.05),也高于陽性對照組(7.7±1.4)的BUN(P＜0.05)。
　　 4病理切片:病理切片顯示,模型對照組腎小球增大,腎小管上皮細胞水腫嚴重,腎間質(zhì)充血。陽性對照組與模型組比較腎小球較小、形態(tài)規(guī)則,腎小管上皮細胞水腫不明顯,腎間質(zhì)充血也較輕

9、;正常對照組腎小球未見增大,無水腫、充血等現(xiàn)象。雙清中、高劑量組各項指標與模型組比較明顯改善,雙清低劑量組作用不明顯,與模型組接近。
　　 結(jié)論:給藥4周后,雙清對早期糖尿病腎病大鼠血糖有降低作用;對其腎臟具有保護作用,且呈劑量依賴性。
　　 目的:觀察雙清對小鼠耳廓血管的擴張作用,以及對血流速度等的影響。
　　 方法:將昆明小鼠分為5組,每組8只,正常對照組給予生理鹽水,陽性對照組給予50mg/kg復(fù)方丹參片水

10、溶液。雙清高、中、低組分別給予6.4g/kg、3.2g/kg、1.6g/kg雙清水溶藥液,各組均按0.2ml/10g腹腔注射給藥。
　　 1％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后,用醫(yī)用橡皮膏貼在小鼠耳廓上去毛,將小鼠腹部向下固定在小鼠觀察臺上,耳廓表面滴加少許液體石蠟。各組分別腹腔注射生理鹽水、復(fù)方丹參或雙清水溶液,微循環(huán)顯微鏡觀察注射前后同一部位耳廓微循環(huán)微動脈(A)、微靜脈(V)口徑,流速變化。拍照記錄給藥前(0min)及給藥后10、

11、20、30min時耳廓微循環(huán)微動脈、微靜脈圖像,并用醫(yī)學(xué)影像處理系統(tǒng)測量血管口徑,比較給藥前后以及各組間差異。
　　 結(jié)果:
　　 1微靜脈口徑變化:正常對照組微靜脈各時間點口徑與0min比較均無顯著性差異。陽性對照組微靜脈口徑10min(50.81)時與Omin(48.44)比較明顯擴張(P＜0.05),20min(50.69)和30min(50.44)時與0min比較擴張極明顯(P＜0.01)。雙清低劑量組微靜脈各時

12、間點口徑與0min比較均無顯著性差異。雙清中劑量組微靜脈10min(53.61)、20min(54.00)、30min(53.44)口徑與0min(50.50)比較均有明顯擴張(P＜0.05)。雙清高劑量組微靜脈10min(59.00)和20min(59.21)口徑與0min(56.36)比較均明顯擴張(P＜0.05),30min與0min比較無顯著性差異。
　　 2微動脈口徑變化:正常對照組微動脈各時間點口徑與0min比較均無

13、顯著性差異。陽性對照組微動脈口徑10min(30.00)時與0min(27.69)比較明顯擴張(P＜0.05),20min(31.50)和30min(32.00)時與0min比較擴張極明顯(P＜0.01)。雙清低劑量組微動脈各時間點口徑與0min比較均無顯著性差異。雙清中劑量組微動脈10min(24.67)和20min(24.94)口徑與0min(21.11)比較明顯擴張(P＜0.05),30min(25.89)與0min比較有極顯著性

14、差異(P＜0.01)。雙清高劑量組微動脈10min口徑與0min比較無顯著性差異,20min(35.50)和30min(35.57)口徑與0min(32.50)比較有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3血流變化:給予生理鹽水和低劑量雙清后,小鼠耳廓微動脈、微靜脈血流流速無明顯變化;毛細血管開放數(shù)目也沒有明顯增多。給予雙清中、高劑量和陽性對照藥后,可見半小時內(nèi)小鼠耳廓微動脈、微靜脈中血流速度變快,血管均逐漸充盈,可以觀察到的毛細