人IL-15基因修飾NKL細胞系的生物學特性研究.pdf

1、目的: NK細胞作為機體固有免疫的重要組成部分是機體抗腫瘤、抗感染的第一道天然防線。其殺傷功能的出現(xiàn)不需要預先刺激或致敏，無MHC(組織相容性復合物)限制性。NK細胞不僅能夠介導對腫瘤細胞的天然殺傷作用，還能夠調(diào)節(jié)特異性和非特異性免疫應答。過繼轉(zhuǎn)輸活化的或同種異體的NK細胞，已經(jīng)應用于白血病和某些實體腫瘤的治療中。 白細胞介素-15(IL-15)由多種組織和細胞亞群產(chǎn)生，與IL-2在功能上有許多相似之處，可以誘導CD34

2、+的細胞分化為NK細胞，并且能夠促進NK細胞的增殖，增強NK細胞的殺傷活性。我們已經(jīng)建立了IL-15基因修飾的NK-92細胞系，證實IL-15的基因修飾能夠增強NK-92細胞對多種腫瘤的殺傷能力。 與NK-92細胞相比，NKL細胞有著不同的殺傷譜，比如，NKL對于人胃癌細胞系SGC7901的殺傷能力強于NK-92細胞，因此可以作為NK-92的重要補充。NKL細胞系由Robertson等建立，來源于CD3-CD16+CD56+的大

3、顆粒淋巴細胞自血病患者的外周血。NKL依賴于IL-2生長，具自然殺傷活性和ADCC效應，其增殖反應也與正常的CD16+CD56dim NK細胞相似。NKL是NK細胞系中與原始NK細胞最為相近的，因此成為過繼免疫治療的又一重要選擇。 本文建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染hIL-15的NKL細胞系，證明IL-15基因修飾的NKL細胞具有更強的增殖、抗凋亡和對肝癌 細胞的殺傷作用，并初步探討了其分子機制。 方法 1.電轉(zhuǎn)將IL-

4、15基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入NKL細胞系。 2.CTLL-2增殖分析測定細胞培養(yǎng)上清中IL-15的生物學活性。 3.酶聯(lián)免疫吸附分析測定細胞培養(yǎng)上清中IL-15的濃度。 4.RT-PCR檢測三種NKL細胞中凋亡相關(guān)基因和殺傷相關(guān)基因的表達水平。 5.CCK方法用于分析三種NKL細胞在不同濃度IL-2和IL-15條件下的增殖水平。 6.流式細胞術(shù)檢測三種NKL細胞凋亡、周期以及膜表面NKG2D和NKG2A分子

5、的表達。 7.MTT方法檢測三種NKL細胞的細胞毒作用。 結(jié)論: NK細胞作為固有免疫的重要組成部分，是抵御病毒感染和腫瘤細胞的第一道防線，由于無需抗原預先作用，就可直接殺傷腫瘤和病毒感染的靶細胞，因此，在腫瘤免疫監(jiān)視和早期抗感染免疫過程中起重要作用。應用NK細胞系成為腫瘤生物治療的重要手段，其中NK-92細胞已經(jīng)進入期臨床試驗。為了克服NK細胞系在應用中的某些不足，基因修飾已經(jīng)成為增強NK細胞殺傷活性的主要手段

6、。迄今為止，已有IL-2，IL-15，SCF，CD20等多種基因用于修飾NK-92細胞，取得重要進展。 為了獲得臨床應用的NK細胞株，我們成功建立了IL-15基因修飾的NKL細胞株，IL-15基因修飾的NKL細胞株在低劑量IL-2和IL-15條件下表現(xiàn)出更強的增殖能力，并且在無血清饑餓狀態(tài)下表現(xiàn)出較強的抗凋亡作用。進一步研究表明，在IL-15基因修飾的NKL細胞中，抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-x1、Mcl-1表達水平顯著升高，