病毒性心肌炎心肌結構蛋白的損傷及其法醫(yī)學意義.pdf

1、病毒性心肌炎(viralmyocarditis，VM)是由親心肌病毒感染所致的以心肌炎癥病變?yōu)橹鞯募膊?。有調(diào)查顯示近幾年其發(fā)病率有逐漸增高的趨勢。猝死是病毒性心肌炎最為嚴重的并發(fā)癥，也是在法醫(yī)病理尸檢中經(jīng)常遇到的現(xiàn)象。由于用于病理診斷病毒性心肌炎的Dallas標準對于界線性心肌炎和無心肌炎鑒別的不確定性以及一部分正常心肌間質(zhì)中可出現(xiàn)的單個或局灶性淋巴細胞浸潤，使得對于一些光鏡下心肌細胞改變不明顯、炎細胞浸潤較少的猝然死亡的案例難以做出準

2、確的判斷。這就給這些案例的診斷和死因鑒定造成了一定的困難。因此，尋找一種有效、簡便的檢測心肌損害的方法用于心肌炎的輔助診斷以明確死因就成為法醫(yī)病理一個迫切需要解決的問題。國外有研究顯示，一些心肌的結構蛋白，在心肌細胞受到缺血、缺氧等損傷時，會產(chǎn)生表達下調(diào)甚至缺失的現(xiàn)象。國內(nèi)一些學者通過對病毒性心肌炎尸檢組織和實驗動物的研究，也發(fā)現(xiàn)了受損心肌中多種結構蛋白表達的下調(diào)和缺染，提示這種現(xiàn)象在受損的心肌細胞中普遍存在。另外Burke也曾指出，對

3、于炎細胞浸潤少、光鏡下心肌細胞改變不明確的病例，可應用免疫組化方法以證實心肌細胞的損害，作為Dallas標準的補充。因此，我們認為建立免疫組化檢測心肌損傷的方法用于輔助心肌炎的診斷是可行的。但是，由于目前這方面的研究較少并存在一定的局限性，如檢測標本例數(shù)及所檢測的蛋白種類較少；應用單一蛋白的檢測較多，多種蛋白比較研究的較少；對心肌內(nèi)蛋白表達的鏡下描述不夠詳細和全面等，而使其離應用于法醫(yī)檢案實踐還有一定的距離。為此，本實驗收集了30例病毒

4、性心肌炎尸檢心肌標本，應用免疫組化方法，對這些標本中的肌動蛋白(actin)、肌紅蛋白(Myoglobin，Mb)和心肌肌鈣蛋白T(cardiactroponinT,cTnT)三種結構蛋白的表達情況進行觀察，描述其鏡下表達特征和分布。并在此基礎上應用計算機圖像分析系統(tǒng)定量比較了這三種蛋白的表達情況。此外，我們還應用原位核酸雜交技術觀察了cTnTmRNA在心肌炎標本中的表達，以明確其在受損心肌中的表達特征，探討其法醫(yī)學意義。我們希望通過上

5、述研究，為法醫(yī)病理尸檢中病毒性心肌炎的診斷提供有價值的參考。研究結果如下： 在明確心肌炎中，我們觀察到位于壞死以及病灶嚴重、炎癥細胞浸潤明顯的區(qū)域三種蛋白100％存在缺染，除此之外，在其炎癥細胞浸潤不明顯的地方也可有局灶性的蛋白表達下調(diào)甚至缺失。這三種蛋白中cTnT的表達信號較強，與缺失部位顏色的對比最為明顯。在界線性心肌炎中，雖然炎癥細胞浸潤不顯著，但同樣可見不同程度的蛋白缺染，其中actin缺染率為29.4％，Mb的缺染率為

6、64.7％，cTnT的缺染率為82.4％。這些缺染的心肌細胞多呈散在小灶狀，且當在同一標本中存在兩種以上蛋白缺失時，這些蛋白缺染的部位存在一致性。此外更為重要的是，我們觀察到在炎癥細胞浸潤顯著的區(qū)域，蛋白缺失的范圍往往小于炎癥細胞所浸潤的范圍，提示炎癥細胞的損傷作用與蛋白的脫失無明確的聯(lián)系。 定量分析三種蛋白的免疫組化結果顯示，正常心肌細胞的PU值與心肌炎未脫失部位的PU值無顯著差異(P＞0.05)；缺失部位的PU值顯著小于周圍

7、未脫失部位的PU值(P＜0.001)；各個蛋白的缺失程度也存在一定的不同，其中cTnT的脫失比率較大，因此與缺染部分的染色對比明顯，易于分辨和觀察。 我們通過原位核酸雜交技術觀察了心肌炎中cTnTmRNA的表達情況，發(fā)現(xiàn)存在著如蛋白一樣的表達下調(diào)和缺失，其發(fā)生的區(qū)域與蛋白缺失的部位基本一致。不同的是，在炎細胞顯著處，其脫失范圍與炎細胞的浸潤范圍相仿，提示炎癥細胞參與了損傷作用。但是，可能由于大部分標本保存的時間過長造成mRNA的

8、降解，只有最近兩年的標本檢測到了結果，其他的未見cTnTmRNA的表達。使實驗未能達到預期的目標。 基于以上的實驗結果，我們得到如下結論： 1.在病毒性心肌炎心肌受損時，三種蛋白均可以發(fā)生不同程度的缺失。它們都可以作為心肌炎心肌損傷的標志蛋白，用于病毒性心肌炎的輔助診斷。其中，cTnT從敏感性、脫失的程度和染色的對比度綜合考慮要優(yōu)于其他兩種蛋白。 2.這種在病毒性心肌炎中心肌細胞結構蛋白的脫失，主要由病毒的直接作