二球懸鈴木花粉主要變應(yīng)原編碼基因的克隆與表達(dá).pdf

1、背景：近數(shù)十年以來(lái)，世界范圍內(nèi)各種變態(tài)反應(yīng)病發(fā)病率明顯增加，尤其在工業(yè)化程度較高的發(fā)達(dá)國(guó)家，各種過(guò)敏性疾病嚴(yán)重影響居民生活質(zhì)量，提高醫(yī)療費(fèi)用，造成經(jīng)濟(jì)損失，已經(jīng)成為世界性衛(wèi)生問(wèn)題。人群中約有五分之一屬于過(guò)敏體質(zhì)，有可能發(fā)生過(guò)敏性疾病。世界衛(wèi)生組織已將此類疾病列為“21世紀(jì)重點(diǎn)研究和預(yù)防的疾病”。 花粉是最常見(jiàn)的氣傳吸入性過(guò)敏原之一，可引起多種過(guò)敏性疾病，如過(guò)敏性鼻炎、支氣管哮喘、過(guò)敏性結(jié)膜炎等?！盎ǚ郯Y”即季節(jié)性變應(yīng)性鼻炎，又稱

2、枯草熱。 二球懸鈴木花粉是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的我國(guó)南方地區(qū)常見(jiàn)的引起特應(yīng)性體質(zhì)者發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)的過(guò)敏原，對(duì)其變應(yīng)原組分和分子生物學(xué)特點(diǎn)的研究開(kāi)始受到研究者重視。 用基因工程制備人工重組變應(yīng)原具有天然變應(yīng)原提取物不可比擬的優(yōu)越性，國(guó)外已開(kāi)始研制常見(jiàn)變應(yīng)原的人工重組蛋白，逐步應(yīng)用于臨床診斷和特異性免疫治療。 目的：提取天然二球懸鈴木花粉總RNA，制備其主要變應(yīng)原的編碼基因克隆，誘導(dǎo)表達(dá)人工重組蛋白，鑒定其生物學(xué)活性和免疫學(xué)特異

3、性。 方法：采集二球懸鈴木花粉，Trizol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。設(shè)計(jì)其主要變應(yīng)原編碼基因的特異性引物，用PCR擴(kuò)增目的片段。將擴(kuò)增的目的片段用雙酶切法與質(zhì)粒pET32a連接，用CaCl2法轉(zhuǎn)入工程菌DH5α制備基因克隆。提取基因克隆導(dǎo)入工程菌BL21a(DE3)，堿裂解法提取DNA，用瓊脂糖電泳鑒定目的片段存在。IPTG誘導(dǎo)表達(dá)變應(yīng)原蛋白，WesternBlotting法鑒定抗原特異性。 結(jié)果：IPTG終濃