基于細胞響應(yīng)譜技術(shù)的雙黃連凍干粉針質(zhì)量一致性研究.pdf

1、中藥注射劑療效確切，臨床應(yīng)用廣泛，是中藥現(xiàn)代化的重要標志。但是頻頻發(fā)生的不良反應(yīng)尤其是過敏與類過敏反應(yīng)，已為中藥注射劑乃至整個中藥行業(yè)的發(fā)展蒙上了一層陰影。在深入剖析中藥注射劑現(xiàn)行質(zhì)量標準及引發(fā)其不良反應(yīng)原因的基礎(chǔ)上，本文提出從生物活性角度出發(fā)，以雙黃連凍干粉針為模式藥，建立密切關(guān)聯(lián)其不良反應(yīng)的生物評價方法，對雙黃連凍干粉針的質(zhì)量一致性進行研究，以期為中藥注射劑的臨床安全有效使用提供新的技術(shù)支持。
　　本文從質(zhì)量一致性角度入手，選

2、取不良反應(yīng)報道較多的代表性藥物雙黃連凍干粉針為模式藥，收集不同批次樣品，并根據(jù)樣品在現(xiàn)實中可能導(dǎo)致質(zhì)量變化的因素自制了系列特殊樣品，在注射劑通則檢查和現(xiàn)行化學(xué)特征圖譜表征檢測其質(zhì)量變化的基礎(chǔ)上，重點引入基于微電子阻抗技術(shù)的 xCELLigence實時細胞分析系統(tǒng)，建立密切關(guān)聯(lián)臨床不良反應(yīng)的細胞響應(yīng)譜方法，對雙黃連凍干粉針正常與特殊樣品質(zhì)量一致性進行研究。本文主要研究結(jié)果如下：
　　1建立了清雙黃連凍干粉針的化學(xué)特征圖譜用于評價其質(zhì)

3、量一致性
　　采用HPLC技術(shù)建立了含21個特征峰的雙黃連凍干粉針樣品化學(xué)特征圖譜，并確認了其中10個主要成分，較為全面地反映了其所含的化學(xué)成分及主要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。結(jié)合相似度分析與聚類分析，考察了基于化學(xué)特征圖譜分析的雙黃連凍干粉針質(zhì)量一致性檢測方法，該方法能夠區(qū)分高溫、光照處理的特殊樣品。
　　2首次建立了基于肥大細胞脫顆粒檢測的細胞響應(yīng)譜方法
　　針對目前雙黃連凍干粉針及其他中藥注射劑所引起不良反應(yīng)以過敏和類過敏

4、反應(yīng)為主，選取肥大細胞RBL-2H3作為模式生物，使用xCELLigence實時細胞分析系統(tǒng)對陽性藥C48/80誘導(dǎo)的RBL-2H3脫顆粒作用進行了實時監(jiān)測，建立了基于肥大細胞脫顆粒檢測的細胞響應(yīng)譜方法。同時結(jié)合肥大細胞脫顆粒后所引發(fā)的一系列生物學(xué)效應(yīng)特點，設(shè)計了以過敏介質(zhì)釋放檢測和細胞形態(tài)學(xué)觀察等為主要評價指標的常規(guī)經(jīng)典脫顆粒實驗，對基于實時在線檢測法的肥大細胞脫顆粒效應(yīng)檢測方法進行驗證。結(jié)果表明，所建細胞響應(yīng)譜方法能夠?qū)崟r動態(tài)監(jiān)測肥

5、大細胞脫顆?，F(xiàn)象。
　　3應(yīng)用細胞響應(yīng)譜技術(shù)研究了雙黃連凍干粉針質(zhì)量一致性
　　應(yīng)用所建立的細胞響應(yīng)譜技術(shù)，對雙黃連凍干粉針正常與特殊樣品進行了檢測，并對方法適用性與可靠性進行了考察。提取各項參數(shù)：脫附時間（ΔT）、曲線下面積（AUC）、抑制率（I1，I2）、相似度（Similarity）。結(jié)果表明，新建方法能夠更好地區(qū)分雙黃連凍干粉針正常樣品與各類特殊樣品。該技術(shù)可作為現(xiàn)行質(zhì)量控制方法的有益補充，用于雙黃連凍干粉針及其他中