豬氣道上皮細胞形態(tài)學(xué)及其干細胞特異性抗原篩選的研究.pdf

1、肺臟是人體與外界進行氣體交換的唯一器官，而肺臟氣道粘膜上皮經(jīng)常暴露于微生物、過敏原及污染源之中，易被侵蝕而造成損傷，同時肺臟上皮本身也在不斷進行著自我修復(fù)來維持肺臟功能的正常。在這一損傷修復(fù)過程中，氣道上皮干/先祖細胞(Airwayepithelialstem/progenitorcell，EpiSPC)起著至關(guān)重要的作用。由此可見，分離鑒定EpiSPC的特性對了解氣道EpiSPC功能以及肺臟疾病的治療有著非常重要的意義。然而，由于臨床

2、人肺臟組織來源困難，這極大地限制了其肺臟組織形態(tài)學(xué)與干細胞生物學(xué)特性等相關(guān)研究;而在常用的動物模型中，豬不但來源廣泛，而且它的肺臟無論在大小、解剖結(jié)構(gòu)、生理特性、還是在細胞生物學(xué)特征上都與人類肺臟極為相近，是人類肺臟的最佳研究模型之一。因此，我們對豬氣道上皮細胞形態(tài)組成學(xué)及干細胞特異性抗原標記的篩選進行了初步的研究，這對分離鑒定豬肺臟氣道上皮干細胞/先祖細胞亞群及其生物學(xué)特性研究有重要的意義，并為進一步研究人類肺臟干細胞生物學(xué)特性及其在

3、維持肺臟動態(tài)平衡、肺臟疾病發(fā)生機制和肺臟組織工程等方面的研究奠定了一定的理論基礎(chǔ)。
　　通過試驗獲得以下結(jié)果:
　　1.豬氣道上皮細胞形態(tài)學(xué)的研究:本試驗采用組織化學(xué)(HE、PAS)和免疫組織化學(xué)(IHC)等方法對豬吸道的不同區(qū)段（氣管、支氣管和細支氣管）的主要上皮細胞類型進行了形態(tài)學(xué)觀察，并對其組成比例進行了統(tǒng)計分析。結(jié)果表明，豬氣道上皮主要由纖毛細胞、基底細胞、克拉拉細胞和杯狀細胞等細胞組成，并且在不同區(qū)段其上皮細胞的類

4、型與組成比例也有一定的差異;因此豬的這種氣道上皮細胞形態(tài)組成學(xué)特征與小鼠肺臟比更接近于人類，由此可見，豬肺臟在氣道上皮細胞組成上比小鼠肺臟更適合于人類肺臟疾病的研究。
　　2.豬EpiSPC特異性表面標記物的篩選:試驗中采用IFC染色，利用CD117、Sca-1、Sox2、CD49f和SSEA-1等10種相關(guān)EpiSPC抗體來鑒定豬氣管EpiSPC特異性表面抗原的表達情況。結(jié)果表明，在豬氣道組織冰凍切片中的染色中沒有檢測到所選用的

5、10種相關(guān)EpiSPC抗體的陽性細胞，而在豬氣道上皮細胞爬片中的IFC染色中觀察到表達CD117和CD49f的陽性細胞數(shù)較多。通過免疫熒光共染試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)具有共同表達CD117和Keratin14或CD49f和Keratin14的陽性細胞。這說明，在正常的生理條件下，豬氣道EpiSPC的數(shù)量極少，不易被檢測。但經(jīng)外界刺激（酶學(xué)消化）后，豬氣道EpiSPC數(shù)量增加易被檢測。因此，CD49f和CD117是豬氣道上皮干細胞分選標記之一，基底細