VEGFR-2靶向載5-FU聚乳酸-羥基乙酸超聲造影劑制備及體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝癌是常見的惡性腫瘤,在非洲以及西太平洋地區(qū)(包括中國(guó))發(fā)病率最高,已經(jīng)嚴(yán)重影響公共健康。由于肝癌發(fā)病隱匿、惡性度高,僅有25％的肝癌患者能夠接受外科手術(shù)治療。因此,肝癌的非手術(shù)治療得到高度重視,不斷涌現(xiàn)新的治療技術(shù)和方法,其中就包括了高強(qiáng)度聚焦超聲(High-intensityfocusedultrasound,HIFU)。但是在HIFU的應(yīng)用中存在消融時(shí)間長(zhǎng)、聲波能量被干擾、靶區(qū)組織殘留等問題。提高HIFU的治療效率,是HIFU技術(shù)

2、進(jìn)一步推廣應(yīng)用必須解決的問題。國(guó)內(nèi)外學(xué)者做了大量實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)了超聲造影劑能夠增強(qiáng)HIFU的消融作用。
　　超聲造影劑能夠增強(qiáng)血流中紅細(xì)胞的背向散射信號(hào),改善超聲圖像的清晰度和對(duì)比度,提高超聲診斷的準(zhǔn)確性。靶向超聲造影劑使超聲影像跨入到特異性的靶向分子成像水平。靶向超聲微泡作為藥物載體,在得到超聲造影圖像的同時(shí),還可以實(shí)現(xiàn)藥物的靶向釋放,增強(qiáng)局部藥物濃度及藥物療效。有學(xué)者制備出包載抗腫瘤藥物的超聲微泡,并研究了其對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性作用

3、。但是將包載抗腫瘤藥物的靶向超聲造影劑與HIFU聯(lián)合起來(lái)消融腫瘤,探求靶向載藥超聲造影劑對(duì)HIFU消融增強(qiáng)效應(yīng)及影響的研究相對(duì)較少。本研究擬制備VEGFR-2靶向載5-FU聚乳酸-羥基乙酸超聲造影劑,研究其特性,為下一步研究靶向載藥超聲造影劑對(duì)HIFU消融增強(qiáng)效應(yīng)及影響奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)分為以下三個(gè)部分:
　　(1)載5-FU聚乳酸-羥基乙酸超聲造影劑制備及其特性。
　　采用復(fù)乳化-溶劑揮發(fā)法與冷凍干燥法制備載5-FU聚乳

4、酸-羥基乙酸超聲造影劑;通過觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)、粒徑分布以及載藥量,篩選出載5-FU超聲造影劑的最佳制備方案。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明5%PVA,10%SP-80為最佳制備條件,制備出的載5-FU超聲微泡呈規(guī)則球形,表面光滑,內(nèi)部中空,大小均一性良好,平均粒徑為(289.4±50.8)nm,載藥量為0.5%。
　　(2)載5-FU聚乳酸-羥基乙酸超聲造影劑體外實(shí)驗(yàn)。
　　采用最佳制備方案制備出載5-FU超聲造影劑;通過體外顯影實(shí)驗(yàn)觀察其體

5、外造影能力;通過CCK-8細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)觀察其對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2的細(xì)胞毒性,并與聚乳酸-羥基乙酸超聲造影劑做比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明制備的載5-FU超聲造影劑具備造影能力和對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2的細(xì)胞毒性作用。
　　(3)VEGFR-2靶向載5-FU聚乳酸-羥基乙酸超聲造影劑制備及體外尋靶實(shí)驗(yàn)。
　　采用碳二亞胺法制備VEGFR-2靶向載5-FU超聲造影劑,并檢測(cè)其粒徑分布及Zeta電位,與載5-FU超聲造影劑做比較;制備R

6、H-123標(biāo)記的VEGFR-2靶向載5-FU超聲造影劑,熒光顯微鏡觀察其形態(tài),免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察其在體外與HUVECs結(jié)合情況,并與RH-123標(biāo)記的載5-FU超聲造影劑做比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示VEGFR-2靶向載5-FU超聲造影劑平均粒徑為(374.5±79.1)nm,Zeta電位為-5.05mv;載5-FU超聲微泡平均粒徑為(289.4±50.8)nm,Zeta電位-11.7mv;RH-123標(biāo)記VEGFR-2靶向載5-FU超聲造影劑呈球