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文檔簡介
1、本文對靶向PLGA-COOH超聲造影劑的制備及體外尋靶進行了研究。本研究分兩部分:
第一部分:
目的:采用共價結合的方法制備靶向高分子超聲造影劑,并考察其體外尋靶能力。
方法:⑴以羧基端乳酸/羥基乙酸共聚物(PLGA-COOH)為成膜材料,采用雙乳化法和冷凍干燥技術制備高分子材料PLGA-COOH超聲造影劑;以普通光學顯微鏡觀察其形態(tài)、大小分散度情況,馬爾文激光粒度儀檢測其粒徑及分布。⑵采用ED
2、C/NHS[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺]作為偶聯(lián)活性劑,以碳二亞胺法將PLGA-COOH超聲造影劑表面上的羧基與人肝癌Hab18單克隆抗體上的氨基共價結合,制備靶向高分子超聲造影劑;采用光學顯微鏡及激光共聚焦觀察該靶向高分子超聲造影劑與肝癌細胞7721在體外的尋靶結合能力。
結果:①采用本方法制備的PLGA-COOH超聲造影劑,外觀為白色粉末狀物質,平均粒徑約(635.5±55)nm。微
3、泡水溶性好,生理鹽水復溶后普通光學顯微鏡觀察,其形態(tài)規(guī)則、呈球形,表面光滑,大小均勻,分散度好,微泡間無明顯粘連、聚集現(xiàn)象;②體外尋靶試驗顯示,該靶向高分子超聲造影劑與普通PLGA-COOH造影劑對照能聚集并牢固結合到肝癌7721細胞表面。
結論:采用碳二亞胺法,通過共價結合的方式,成功制備出靶向PLGA-COOH超聲造影劑,該靶向造影劑在體外具有較強的特異性尋靶結合能力。
第二部分:
目的:將
4、鏈酶親和素以共價結合的方式連接在PLGA-COOH超聲造影劑表面,通過與生物素化抗體結合,制備靶向PLGA-COOH超聲造影劑,并考察其體外尋靶結合能力。
方法:采用EDC/NHS[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺]作為偶聯(lián)活性劑,以碳二亞胺法將PLGA-COOH超聲造影劑表面上的羧基與鏈酶親和素上的氨基共價結合,制備表面連接鏈酶親和素的PLGA-COOH超聲造影劑。采用紅外與免疫熒光檢測鏈酶
5、親和素與PLGA-COOH超聲造影劑連接的情況。將生物素化人肝癌Hab18單克隆抗體與連接鏈酶親和素的PLGA-COOH超聲造影劑結合,制備靶向高分子超聲造影劑;采用光學顯微鏡及激光共聚焦觀察該靶向高分子超聲造影劑與肝癌細胞7721在體外的尋靶結合能力。
結果:紅外與免疫熒光檢測顯示鏈酶親和素通過共價鍵成功的連接在高分子造影劑上,并存在活性。體外尋靶試驗顯示靶向PLGA-COOH超聲造影劑與普通PLGA-COOH超聲造影劑
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