靶向包載經(jīng)PEG修飾的重組腺病毒PLGA超聲造影劑的制備及特性研究.pdf

1、第一部分包載經(jīng)PEG修飾的重組腺病毒PLGA超聲造影劑的制備及特性研究
　　 目的:1、制備包載經(jīng)聚乙二醇(PEG)修飾的rAd-EGFP-HIF-1a重組腺病毒的乳酸/羥基乙酸共聚物(Polylactic-co-glycolic acid,PLGA)超聲造影劑。2、檢測(cè)該P(yáng)LGA超聲造影劑的物理性質(zhì)、體外釋放病毒規(guī)律、體外釋放病毒轉(zhuǎn)染效率及其產(chǎn)生的免疫反應(yīng)程度。
　　 方法:1、重組腺病毒的PEG修飾,制得PEG-Ad

2、v。2、采用雙乳化法制備載PEG-Adv和載Adv的PLGA超聲造影劑。3、采用掃描電子顯微鏡觀察該兩種超聲造影劑的表面形態(tài);使用Malvern激光粒徑測(cè)量?jī)x檢測(cè)該造影劑粒徑分布頻率及均值;紫外分光光度計(jì)測(cè)定其包封率及體外釋放病毒規(guī)律;用ELISA法檢測(cè)其產(chǎn)生的免疫反應(yīng)程度。
　　 結(jié)果:1、按每個(gè)病毒顆粒衣殼蛋白質(zhì)含7500個(gè)賴氨酸殘基計(jì)算活化的甲氧基聚乙二醇(mPEG-SPA)用量,mPEG-SPA與Lys為1:1摩爾比加入

3、相應(yīng)量得mPEG-SPA,制得PEG-SPA。2、載PEG-Adv的PLGA和載Adv的PLGA分布均勻,形態(tài)相似,平均粒徑分別為6.23±1.2μm、6.19±1.0μm;包封率分別為17.23％、14.35%;PEG-Adv和單純Adv從PLGA釋放規(guī)律相似,但從PLGA釋放出來的PEG-Adv的轉(zhuǎn)染效率比從PLGA釋放出來的單純Adv要高;包載PEG-Adv的PLGA產(chǎn)生的免疫反應(yīng)強(qiáng)度也較低。
　　 結(jié)論:用PLGA超聲造

4、影劑包載PEG化的重組腺病毒rAd-EGFP/HIF-1α,可改善Adv在體內(nèi)安全性差的缺點(diǎn),釋放出來的病毒穩(wěn)定性好,轉(zhuǎn)染效率較高,其作為心血管疾病的基因治療載體具有較好的研究前景。
　　 第二部分結(jié)合單克隆抗體的靶向包載經(jīng)PEG修飾的重組腺病毒PLGA造影劑的制備及其體外尋靶實(shí)驗(yàn)
　　 目的:采用共價(jià)結(jié)合的方法制備靶向包載經(jīng)PEG修飾的重組腺病毒PLGA-COOH造影劑,并考察其體外尋靶能力。
　　 方法:采用

5、EDC/NHS[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺]作為偶聯(lián)活性劑,以碳二亞胺法將包載經(jīng)PEG修飾的重組腺病毒PLGA-COOH造影劑表面上的羧基與抗人E-seletin單克隆抗體上的氨基共價(jià)結(jié)合,制備靶向高分子超聲造影劑;采用光學(xué)顯微鏡觀察該靶向PLGA-COOH造影劑與人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞在體外的尋靶結(jié)合能力。
　　 結(jié)果:體外尋靶實(shí)驗(yàn)顯示,該靶向包載經(jīng)PEG修飾的重組腺病毒PLGA-COOH超聲