兔VX2肝臟轉(zhuǎn)移瘤門脈血流動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的:建立兔vx2轉(zhuǎn)移瘤模型,使用DSA及CT等影像設(shè)備,通過腹腔動(dòng)脈造影、肝固有動(dòng)脈造影、CT灌注成像探討肝轉(zhuǎn)移瘤的血液供應(yīng)。通過觀察、分析TACE前后門靜脈的影像學(xué)表現(xiàn),研究TACE對(duì)兔肝vx2轉(zhuǎn)移瘤模型門脈血流動(dòng)力學(xué)改變情況,以明確在TACE前后門靜脈是否參與轉(zhuǎn)移瘤供血。
　　 方法:
　　 1.試驗(yàn)動(dòng)物模型建立
　　 1.1 vx2細(xì)胞株制備將vx2瘤細(xì)胞接種于新西蘭大白兔后腿上段外側(cè)肌肉,2周左右接種處

2、可捫及一2cm×2cm實(shí)質(zhì)性包塊。由耳緣靜脈迅速注入40mL空氣處死兔子。無菌條件下剝離腫瘤包塊,切取邊緣生長(zhǎng)旺盛的魚肉樣組織置于盛有生理鹽水的平皿中,用眼科剪剔除豆腐渣樣壞死組織和結(jié)締組織。瘤組織制成細(xì)胞懸液。
　　 1.2 vx2瘤細(xì)胞懸液的制備在超凈臺(tái)上,將新鮮魚肉樣癌組織在生理鹽水內(nèi)用眼科剪剪碎,反復(fù)吹打,經(jīng)200目濾網(wǎng)篩過濾制成瘤細(xì)胞懸液,離心(1000 r/min)5 min,臺(tái)盼藍(lán)染色后活細(xì)胞計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞密度為1

3、×106/ml。
　　 1.3 肝vx2轉(zhuǎn)移瘤模型的建立:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)前禁食12h,用1％戊巴比妥鈉3ml/kg耳緣靜脈注射全麻,取仰臥位,固定四肢于手術(shù)臺(tái)上,上腹部備皮,常規(guī)消毒鋪巾,于劍突下2cm正中開腹約2-3cm長(zhǎng),暴露肝左葉,緩慢注入vx2細(xì)胞懸液0.3ml,注射完畢后快速拔針,在穿刺點(diǎn)處附上一小塊無菌明膠海綿塊壓迫止血。確認(rèn)無出血及瘤細(xì)胞溢出后還納肝臟,逐層縫合。術(shù)后青霉素40萬u靜脈緩慢推注,1次/日,連續(xù)3 d。<

4、br>　　 2.實(shí)驗(yàn)對(duì)象的選擇分別在種植后14天對(duì)肝vx2瘤灶行CT平掃加灌注掃描。肝臟平掃,掃描參數(shù):80kV,200mA,FOV14,層厚2.5mm,螺距0.969；灌注掃描采用高壓團(tuán)注方式,造影劑碘海醇(320mg/ml)1ml/kg,速度為1 ml/s,延遲5s掃描,共掃描30S。在CT檢查明確為肝臟移植瘤的兔子中,選擇瘤灶體積大約為1.5-2.5cm門靜脈顯示清晰的10只兔子作為研究對(duì)象,符合率47.6％,其余11只種植成功

5、的兔子中門靜脈顯示不清的2例,瘤灶體積過大的5例(直徑大于3.5cm)瘤灶體積過小的4例(直徑小于1cm)。符合試驗(yàn)條件的兔子在種植后第15天進(jìn)行介入治療。
　　 3.介入治療
　　 介入治療選用的數(shù)字減影血管造影機(jī)為SIEMENS ANGIOSTARPlus。實(shí)驗(yàn)兔麻醉、固定后,腹股溝區(qū)常規(guī)消毒鋪巾。在右側(cè)腹股溝區(qū)域股動(dòng)脈搏動(dòng)最強(qiáng)處沿股骨走形縱行切開皮膚,暴露股血管鞘,分離出股動(dòng)脈長(zhǎng)約2cm,用TERUMO公司生產(chǎn)的5

6、F導(dǎo)管鞘內(nèi)的穿刺套管針(18G)穿刺入股動(dòng)脈,退出針芯,在鞘尾端迅速擰上Y閥防止出血,跟入TERUMOPROGREAT微導(dǎo)管及導(dǎo)絲,透視下尋找腹腔動(dòng)脈。行腹腔動(dòng)脈造影,對(duì)比劑應(yīng)用碘的質(zhì)量濃度為370m g/ml的優(yōu)維顯,延時(shí)注射1 s,采集速率3幀/秒。注射速率1ml/秒,注射劑量為6ml。注意觀察門靜脈顯示情況。后超選擇至肝固有動(dòng)脈,行肝固有動(dòng)脈造影注射劑量為3ml,注射速率0.5ml/秒.再超超選至瘤灶供血?jiǎng)用}進(jìn)行栓塞治療。碘油使用

7、最大劑量1.5ml,實(shí)際使用劑量以透視下碘油無反流為注射標(biāo)準(zhǔn)。
　　 4.CT檢查
　　 所有進(jìn)行介入栓塞治療的兔子均于vx2瘤株種植后兩周和介入栓塞術(shù)后及介入治療術(shù)后10-14天進(jìn)行螺旋CT平掃以及灌注掃描。檢查采用美國(guó)GE公司Light Speed Pro32層螺旋CT機(jī)。由于介入栓塞后即時(shí)CT掃描腫瘤區(qū)域碘油沉積對(duì)門靜脈的顯示有較大影響,門靜脈顯示不清。選取種植后兩周和介入術(shù)后10-14天的CT灌注圖像作為此次試驗(yàn)

8、的分析對(duì)象。
　　 5.CT及DSA圖像處理方法分別選取進(jìn)行介入栓塞治療的兔子的vx2瘤株種植術(shù)后兩周和介入術(shù)后10-14天的CT灌注圖像,在灌注圖像中分別選擇腫瘤中心區(qū),正常肝實(shí)質(zhì)區(qū)和門靜脈區(qū)將選好興趣區(qū)的CT圖像傳送至CT工作站,應(yīng)用去卷積灌注軟件獲得腫瘤中心、門靜脈和正常肝實(shí)質(zhì)興趣區(qū)時(shí)間密度曲線(TDC)；選擇腫瘤興趣區(qū)時(shí)要避開大血管。選取腹腔動(dòng)脈造影門靜脈期序列圖像,每秒選擇一幅圖像,將DSA圖像傳輸至PC工作站,用SI

9、EMENS專用Quantcor Lva軟件將DICOM圖像轉(zhuǎn)換為TIF格式。再用PhotoShop進(jìn)行定量分析。分別測(cè)量轉(zhuǎn)移瘤中心區(qū)域、門靜脈和腫瘤周邊正常肝實(shí)質(zhì)灰度(K值,間接代表密度),并畫出時(shí)間密度曲線(TDC)。其方法是:用PhotoShop.cs打開圖像文件,在菜單欄中選取窗口,點(diǎn)擊下拉菜單中導(dǎo)航器,選取信息,在K:區(qū)域點(diǎn)擊跟蹤實(shí)際顏色值小圖標(biāo),在下拉菜單中選取灰度,用工具欄中的吸管工具,讀取興趣區(qū)K值百分?jǐn)?shù)。純白區(qū)域?yàn)?％,

10、純黑區(qū)域?yàn)?00％。
　　 6.病理檢查
　　 進(jìn)行介入治療的兔子在其死亡后均剖腹探查,vx2肝癌是突出于肝表面結(jié)節(jié)樣的包塊,質(zhì)地較硬,與正常肝組織分界不清,部分表面具有光澤,呈魚肉樣(圖1)。病理切片檢查顯示其病理類型為鱗癌(圖2)。
　　 7.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,對(duì)栓塞前后灌注CT門靜脈峰值時(shí)間及門靜脈峰值(HU)采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)

11、學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.DSA表現(xiàn)腹腔動(dòng)脈造影時(shí)肝固有動(dòng)脈顯示清晰,門靜脈顯示清晰,腫瘤呈環(huán)形強(qiáng)化或片狀影。腹腔動(dòng)脈造影動(dòng)脈期為1-7s,門靜脈顯影時(shí)間為7-21s,從栓塞前腹腔動(dòng)脈造影靜脈期TDC中可以看出門靜脈的密度(k值)峰值為41％～58％平均為(53.35±9.28)％,正常肝實(shí)質(zhì)密度(K值)峰值31％～45％,平均為(38.17±4.26)％腫瘤中心密度(K值)峰值為37～50平均為(45.13±3

12、.03.)％。腫瘤中心密度表現(xiàn)為緩慢下降的趨勢(shì),而正常肝實(shí)質(zhì)密度則呈現(xiàn)持續(xù)緩慢上升的態(tài)勢(shì),在14s以后,腫瘤中心的密度小于正常肝實(shí)質(zhì)的密度。而門靜脈表現(xiàn)為先是緩慢上升的平臺(tái),然后在10s后表現(xiàn)為快速上升期。此時(shí)門靜脈密度大于腫瘤中心區(qū)的密度。栓塞后腹腔動(dòng)脈造影門脈期TDC表現(xiàn)同栓塞前無明顯變化(腫瘤中心密度(K值)峰值為24～41平均為(36.39±1.87)密度值與栓塞前相比有所下降主要受碘油沉積影響)。
　　 2.CT表現(xiàn)v

13、x2瘤株種植兩周后CT平掃時(shí)腫瘤多呈等或低密度區(qū),灌注掃描時(shí)動(dòng)脈期表現(xiàn)為不均勻強(qiáng)化。靜脈期表現(xiàn)為瘤灶邊緣環(huán)形強(qiáng)化范圍擴(kuò)大,所有CT掃描門靜脈均顯示良好。介入栓塞后即刻CT掃描由于腫瘤組織碘油沉積的影響門靜脈顯示不清無法測(cè)量其時(shí)間密度曲線。介入栓塞術(shù)后10-14天行CT平掃加灌注掃描,腫瘤區(qū)域仍有少量碘油沉積,動(dòng)脈期表現(xiàn)為環(huán)形強(qiáng)化,門脈期時(shí)由于碘油大部被吸收門靜脈顯示受碘油影響較小,可顯示清晰。通過去卷積灌注軟件獲得栓塞前后門靜脈、腫瘤中

14、心、正常肝實(shí)質(zhì)時(shí)間密度曲線。從栓塞前TDC中可得到門靜脈密度(HU)峰值為115-160平均為143,腫瘤中心密度(HU)峰值為68-92平均為76,正常肝實(shí)質(zhì)密度(HU)峰值為83-121平均為106。從TDC中可以看出門靜脈表現(xiàn)為快速上升態(tài)勢(shì),正常肝實(shí)質(zhì)表現(xiàn)為緩慢上升,而腫瘤中心表現(xiàn)為緩慢下降或平臺(tái)期。介入栓塞后TDC與栓塞前TDC相比無明顯變化(腫瘤中心密度(HU)峰值為89-141平均為118,密度與栓塞前相比有所上升主要受碘油

15、沉積影響)。
　　 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:通過對(duì)栓塞前后門靜脈峰值(HU)進(jìn)行t檢驗(yàn)得出t=0.885 p=0.399(P>0.05)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過對(duì)門靜脈峰值時(shí)間進(jìn)行t檢驗(yàn)得出t=0.287,P=0.78(P>0.05)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.CI、灌注掃描時(shí)門靜脈顯示清晰,選取vx2瘤株種植術(shù)后兩周和介入術(shù)后10-14天的CT灌注圖像,應(yīng)用去卷積灌注軟件進(jìn)行分析?？傻贸瞿[瘤中心區(qū)密度不隨門靜脈密

16、度的變化而變化,門靜脈在介入栓塞后仍不參與轉(zhuǎn)移瘤的供血。
　　 2.DSA腹腔動(dòng)脈造影時(shí),門靜脈顯示清晰,選取靜脈期序列造影圖像,通過PhotoShop軟件進(jìn)行定量分析。通過TDC可以看出腫瘤栓塞前在靜脈期序列中門靜脈在1—6s時(shí)表現(xiàn)為高速上升態(tài)勢(shì),在7-13秒表現(xiàn)為緩慢下降。正常肝實(shí)質(zhì)在靜脈期表現(xiàn)為緩慢上升,腫瘤中心區(qū)表現(xiàn)為緩慢下降或平臺(tái)期。在腫瘤栓塞后由于碘油沉積的影響腫瘤中心區(qū)平均密度值大幅下降,但從時(shí)間密度曲線中仍然可以