CD40-CD40L系統(tǒng)在急性腦梗死中的臨床意義及其影響斑塊穩(wěn)定性的機(jī)制研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎性疾病,免疫調(diào)節(jié)起著至關(guān)重要的作用。CD40與CD40配體(CD40L,CD154)是一對(duì)互補(bǔ)跨膜糖蛋白,分別屬于腫瘤壞死因子受體(tumor necrosis factor receptor,TNFR)和TNF超家族成員,是體液免疫和細(xì)胞免疫的一條重要的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,在抗原提呈和自身免疫性疾病中起重要作用。CD40L在體內(nèi)主要以2種形式存在,即與相應(yīng)細(xì)胞膜結(jié)合的膜結(jié)合型CD40L(membrahe-boun

2、d CD40L,mCD40L)和游離狀態(tài)的可溶性CD40L(soluble CD40L,sCD40L)。近年來(lái)的研究表明CD40-CD40L系統(tǒng)參與了動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis,AS)的起始、發(fā)展和斑塊破潰后急性并發(fā)癥。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的上皮細(xì)胞、單核一巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞上均有CD40和CD40L表達(dá),而在正常動(dòng)脈組織中沒(méi)有或低表達(dá)。CD40L與CD40鏈接能誘導(dǎo)人類血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子,如E-選擇素、血管

3、細(xì)胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM)-1和細(xì)胞間黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM)-1,并刺激釋放趨化因子和細(xì)胞因子,如白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-8、調(diào)節(jié)活化正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌的趨化因子(regulated upon Activation Normal T-cell Exoressed andSecreted,RAN

4、TES)或巨噬細(xì)胞炎性蛋白1a,這些分子參與了動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。應(yīng)用特異性抗CD40L抗體阻斷CD40-CD40L之間的相互作用可明顯抑制AS斑塊的形成,并使病灶內(nèi)成分改善,穩(wěn)定性增加,巨噬細(xì)胞和脂質(zhì)減少,平滑肌和膠原纖維增加。因此,CD40-CD40L系統(tǒng)不但參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成,更重要的是可能參與使斑塊不穩(wěn)定、破潰,導(dǎo)致血栓形成。 目前CD40-CD40L系統(tǒng)與急性冠脈綜合征的關(guān)系研究已成為熱點(diǎn),動(dòng)脈粥樣硬化是腦

5、梗死的基本病因,但該系統(tǒng)在急性腦梗死中的作用研究尚少,本研究著重觀察不同病因類型腦梗死、單純頸動(dòng)脈狹窄及正常對(duì)照組周?chē)獑魏思?xì)胞CD40L表達(dá)和血清sCD40L水平,分析人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中CD40表達(dá)與臨床卒中事件的關(guān)系,研究CD40-CD40L系統(tǒng)在急性腦梗死中的臨床意義及對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的作用。通過(guò)觀察頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中CD40、CD40L與MMP9的關(guān)系,探討CD40-CD40L系統(tǒng)影響斑塊穩(wěn)定性的機(jī)制。期望找到判斷

6、斑塊穩(wěn)定性、腦梗死病因和嚴(yán)重程度的簡(jiǎn)便生物學(xué)指標(biāo),并為治療和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和腦梗死找到新的干預(yù)靶點(diǎn)。 第一部分 急性腦梗死患者周?chē)獑魏思?xì)胞CD40L表達(dá)和血清sCD40L的臨床意義 目的:觀察不同病因類型急性腦梗死患者周?chē)獑魏思?xì)胞CD40L表達(dá)和血清sCD40L水平的變化,探討其在診斷大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死和判斷腦梗死病情中的價(jià)值,研究其對(duì)腦動(dòng)脈粥樣硬化及其斑塊穩(wěn)定性的作用。 方法:入選我院神經(jīng)內(nèi)科的急性腦

7、梗死患者82例,按SSS-TOAST分型分為大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死組30例、小動(dòng)脈閉塞型腦梗死組36例和心主動(dòng)脈栓塞型腦梗死組16例,收集有頸動(dòng)脈粥樣硬化狹窄而無(wú)缺血性卒中事件患者17例為單純頸動(dòng)脈狹窄組,另設(shè)正常對(duì)照組20例。對(duì)急性腦梗死患者進(jìn)行NIHSS評(píng)分、Barthel指數(shù)、改良Rankin評(píng)分,分別從神經(jīng)功能、日常生活活動(dòng)能力和殘疾狀況對(duì)患者病情進(jìn)行全方面評(píng)估。采用直接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組周?chē)獑魏思?xì)胞CD40L表達(dá),E

8、LISA檢測(cè)血清sCD40L水平,全自動(dòng)生化儀以免疫散射比濁法檢測(cè)各組血清hs-CRP水平。 結(jié)果: 1.大動(dòng)脈粥樣硬化腦梗死組血清hs-CRP水平高于單純頸動(dòng)脈狹窄組(P<0.05)。2.周?chē)獑魏思?xì)胞CD40L表達(dá),動(dòng)脈粥樣硬化患者高于無(wú)動(dòng)脈粥樣硬化患者(P<0.01),其診斷動(dòng)脈粥樣硬化的敏感性和特異性高于血清hs-CRP(P<0.01);大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死組高于單純頸動(dòng)脈狹窄組(P<0.01),其判斷斑塊穩(wěn)定性的敏感

9、性和特異性高于血清hs-CRP(P<0.01);大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死高于其他類型腦梗死(P<0.01),其診斷大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死的敏感性高于血清hs-CRP(P<0.01),兩者的特異性無(wú)顯著性差異(P>0.05)。3.血清sCD40L水平與NIHSS評(píng)分有正相關(guān)關(guān)系(r=0.537,P<0.01),相關(guān)性高于hs-CRP(r=0.432,P<0.01);sCD40L水平與Barthel指數(shù)有負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.515,P<0.

10、01),相關(guān)性高于hs-CRP(r=-0.510,P<0.01);sCD40L與改良Rankin評(píng)分有正相關(guān)關(guān)系(r=0.589,P<0.01),相關(guān)性高于hs-CRP(r=0.482,P<0.01)。 結(jié)論:血清hs-CRP水平與腦動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性相關(guān)；周?chē)獑魏思?xì)胞CD40L表達(dá)與動(dòng)脈粥樣硬化、斑塊穩(wěn)定性和大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死相關(guān)；單核細(xì)胞CD40L表達(dá)在判斷動(dòng)脈粥樣硬化、斑塊穩(wěn)定性和診斷大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死上比血

11、清hs-CRP具有更高的敏感性和特異性；血清sCD40L水平與腦梗死病情的嚴(yán)重程度成正相關(guān),與患者的日常生活活動(dòng)能力成負(fù)相關(guān),相關(guān)性高于血清hs-CRP,可作為反映腦梗死病情輕重的生物學(xué)指標(biāo)。 第二部分 CD40在人頸動(dòng)脈粥樣硬化及斑塊穩(wěn)定性中的作用 目的:觀察正常頸動(dòng)脈和頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中CD40 mRNA水平和蛋白表達(dá)情況,分析其與臨床卒中事件的關(guān)系,探討其與動(dòng)脈粥樣硬化及斑塊穩(wěn)定性之間的關(guān)系。 方法:收集

12、頸動(dòng)脈粥樣硬化狹窄(>70％)行頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)的頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊標(biāo)本28例,根據(jù)患者有無(wú)發(fā)生急性缺血性腦卒中事件分為有臨床卒中事件組和無(wú)臨床卒中事件組,另收集尸檢正常頸動(dòng)脈標(biāo)本8例作為對(duì)照組。Realtime PCR檢測(cè)各組CD40 mRNA水平,Western blotting檢測(cè)各組CD40蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果:頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊CD40 mRNA水平高于正常頸動(dòng)脈(P<0.01),有臨床卒中事件組CD40 mRNA水平

13、高于無(wú)臨床卒中事件組(P<0.01)。正常頸動(dòng)脈中CD40基本不表達(dá),無(wú)卒中事件組CD40表達(dá)明顯高于正常頸動(dòng)脈,有卒中事件組又明顯高于無(wú)卒中事件組。 結(jié)論:頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中CD40的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平較正常頸動(dòng)脈明顯增高,有臨床卒中事件的不穩(wěn)定斑塊增高更加顯著,提示CD40參與了動(dòng)脈粥樣硬化的形成,并且與斑塊穩(wěn)定性相關(guān)。 第三部分 CD40-CD40L系統(tǒng)影響動(dòng)脈粥樣硬化及斑塊穩(wěn)定性的機(jī)制研究 目的:研究頸動(dòng)脈

14、粥樣硬化斑塊中CD40和MMP9 mRNA水平及蛋白表達(dá)的關(guān)系,并觀察CD40、CD40L和MMP9表達(dá)及分布關(guān)系,探討CD40-CD40L系統(tǒng)影響動(dòng)脈粥樣硬化及斑塊穩(wěn)定性的可能機(jī)制。 方法:收集頸動(dòng)脈粥樣硬化狹窄(>70％)行頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)患者的頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊標(biāo)本28例,根據(jù)患者有無(wú)發(fā)生急性缺血性腦卒中事件分為有臨床卒中事件組和無(wú)臨床卒中事件組,另收集尸檢正常頸動(dòng)脈標(biāo)本8例作為對(duì)照組。Realtime PCR檢測(cè)各組CD

15、40和MMP9 mRNA水平,Western blotting檢測(cè)各組CD40和MMP9蛋白表達(dá)情況。免疫組化檢測(cè)各組CD40、CD40L和MMP9表達(dá)及分布。 結(jié)果: 1.頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中CD40、MMP9mRNA水平高于正常頸動(dòng)脈(P<0.01),且有臨床卒中事件組CD40、MMP9mRNA水平高于無(wú)臨床卒中事件組(P<0.01)：2.CD40 mRNA與MMP9mRNA有正相關(guān)關(guān)系(r=0.964,P<0.01);3.

16、正常頸動(dòng)脈中CD40和MMP9基本不表達(dá),無(wú)卒中事件組CD40和MMP9的蛋白表達(dá)明顯高于正常頸動(dòng)脈,有卒中事件組又明顯高于無(wú)卒中事件組；4.免疫組化顯示CD40、CD40L主要表達(dá)于動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞,MMP9主要位于膠原蛋白和平滑肌細(xì)胞上,CD40、CD40L和MMP9均在斑塊肩部表達(dá)增多尤為明顯,CD40、CD40L和MMP9表達(dá)有卒中事件組高于無(wú)臨床卒中事件組(P<0.01),無(wú)卒中事件組高于正常頸動(dòng)脈(P<

17、0.01);5.CD40、CD40L與MMP9表達(dá)有正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)。 結(jié)論: CD40-CD40L系統(tǒng)可能通過(guò)上調(diào)MMP9導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化及斑塊不穩(wěn)定。 綜上所述,CD40-CD40L系統(tǒng)可以成為判斷腦動(dòng)脈粥樣硬化、斑塊穩(wěn)定性、腦梗死病情輕重和診斷大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死的敏感的生物學(xué)指標(biāo),CD40-CD40L系統(tǒng)可能通過(guò)上調(diào)MMP9導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化和斑塊不穩(wěn)定。進(jìn)一步深入研究CD40-CD40L系統(tǒng)在動(dòng)脈粥樣