共刺激分子CD40-CD40L和OX40-OX40L在乳腺癌中的表達(dá)及其生物學(xué)意義.pdf

1、該課題以乳腺癌為研究對(duì)象,探討CD40、OX40、OX40L等相關(guān)分子在甩腺癌細(xì)胞上的表達(dá)及其臨床意義,并在體外以rhCD40L為激動(dòng)劑研究CD40信號(hào)對(duì)乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響,為臨床的運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ);并對(duì)OX40L進(jìn)行了基因克隆、表達(dá)和生物學(xué)特性研究,為研制具有自身知識(shí)產(chǎn)權(quán)的鼠抗人單克隆抗體和開展相關(guān)研究提供了實(shí)驗(yàn)手段.一、CD40及相關(guān)分子在乳腺癌中的表達(dá)及其生物學(xué)意義.該研究采用了免疫組織化學(xué)方法對(duì)58例乳腺癌石

2、蠟切片CD40分子的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)正常乳腺組織不表達(dá)或弱表達(dá)CD40分子,而在乳腺癌細(xì)胞中均有一定程度的表達(dá),陽性表達(dá)率分別為37.9％,與正常乳腺組織的表達(dá)有顯著性差異(P<0.01).組化結(jié)果還顯示,58例乳腺癌有21例P53陽性表達(dá)(36.2％),與乳腺癌腫瘤分化程度、瘤塊大小有關(guān)(P<0.05),與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05).VEGF分子在各種病理類型腫瘤中高表達(dá)(81％),基表達(dá)與乳腺癌腫瘤瘤塊大小有關(guān)(P<0.0

3、5),與分化程度、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05),同時(shí)也與CD40、P53分子表達(dá)無明顯相關(guān)性.二、CD40信號(hào)對(duì)乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響.兩株高表達(dá)CD40的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MDA-MB-435細(xì)胞,經(jīng)rhCD40L激發(fā)后,其HLA-DR分子有不同程度的上調(diào),腫瘤細(xì)胞自身高表達(dá)CD44和CD54可通過與各自相應(yīng)配體結(jié)合,穩(wěn)定細(xì)胞間接觸,增強(qiáng)免疫原性和促進(jìn)T細(xì)胞活化.同時(shí),TR-PCR結(jié)果顯示腫瘤上皮細(xì)胞經(jīng)CD4

4、0激發(fā)后T細(xì)胞活化和趨化因子RANTES的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào),推測(cè)其編碼的蛋白可能參與了對(duì)T細(xì)胞的趨化和活化.三、人OX40L基因克隆、表達(dá)及生物學(xué)特性研究.該部分研究在克隆OX40L基因的基礎(chǔ)上,構(gòu)建了pcDNA3.1-OX40L質(zhì)粒,從而轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細(xì)胞L929,成功構(gòu)建轉(zhuǎn)基因細(xì)胞L929-OX40L,并進(jìn)行相關(guān)的生物學(xué)特性研究.四、OX40、OX40L分子在乳腺癌中的表達(dá)及其生物學(xué)意義.免疫組化的結(jié)果表明OX40、OX40L分子不僅表

5、達(dá)在乳腺癌浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞上(資料未顯示),也異常表達(dá)在乳腺腫瘤細(xì)胞上,陽性表達(dá)率分別為82.7％、53.4％,與正常乳腺組織的不表達(dá)或弱表達(dá)有顯著性差異(P<0.01).對(duì)OX40、OX40L陽性過表達(dá)與乳腺癌多項(xiàng)臨床指標(biāo)相關(guān)性進(jìn)行了分析,表明OX40、OX40L在乳腺癌中的陽性表達(dá)均與腫瘤瘤塊大小(P<0.05)有關(guān),二者表現(xiàn)相反的趨勢(shì).OX40、OX40L表達(dá)均與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05).因此,OX40、OX40L可作為區(qū)