OCT4在膀胱癌中的表達(dá)及其意義的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 0 9 級(jí)碩士學(xué)位論文O C T 4 在膀胱癌中的表達(dá)及其意義的研究E x p r e s s i o na n d s i g n i f i c a n c eo f O C T 4 p r o t e i ni nb l a d d e r c a n c e r課題來(lái)源： 自選課題專 業(yè) 名 稱學(xué)位申請(qǐng)人指 導(dǎo) 教 師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員泌尿外科學(xué)趙朋朋劉春曉教授高 新教授毛向明教授鄧春華教授姚友生教

2、授趙 明教授論文評(píng)閱人 鄭少波教授姚友生教授2 0 12 年5 月1 日 廣州摘要經(jīng)基本明確，其基因調(diào)節(jié)通路仍欠明確。由于O C T 4 主要表達(dá)于胚胎及生殖細(xì)胞腫瘤中，多數(shù)研究針對(duì)上述腫瘤，并且已經(jīng)證實(shí)O C T 4 為人生殖腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物、人干細(xì)胞標(biāo)志物。國(guó)內(nèi)外有研究證實(shí)膀胱癌組織中有O C T 4 的表達(dá)，多數(shù)認(rèn)為其表達(dá)差異性與病理分級(jí)、浸潤(rùn)程度有相關(guān)性，與臨床分期、年齡等無(wú)相關(guān)性，但在是否于膀胱癌轉(zhuǎn)移有相關(guān)性上存有異議。同時(shí)對(duì)

3、于膀胱癌細(xì)胞株的研究較為欠缺。本實(shí)驗(yàn)將從膀胱癌腫瘤組織標(biāo)本及5 株膀胱癌細(xì)胞株兩個(gè)層面進(jìn)行研究，通過(guò)免疫組化、W e s t e r nB l o t 和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)( P C R ) 技術(shù)檢測(cè)o C T 4在膀胱癌組織及膀胱癌細(xì)胞株中的表達(dá)。進(jìn)一步明確O C T 4 與膀胱癌生物學(xué)行為的相關(guān)性，探討O C T 4 能否作為膀胱癌腫瘤標(biāo)記物。目的：采用蛋白印跡技術(shù)( W e s t e r nB l o t t i n g )

4、、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)( R T - P C R ) 檢測(cè)O C T 4 在膀胱尿路上皮癌細(xì)胞株R T - 4 ，T c c - S u p ，K K 4 7 ，T 2 4 ，5 6 3 7 及人膀胱上皮永生化細(xì)胞株S V - H U C - 1 中的表達(dá)，為研究O C T 4 在膀胱癌發(fā)生中的作用及可能機(jī)制打下基礎(chǔ)。同時(shí)采用免疫組化技術(shù)，檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子O C T 4在膀胱癌及膀胱J 下常組織是否表達(dá)及其表達(dá)水平的差異性，分析其與分化

5、程度、臨床分期、復(fù)發(fā)、預(yù)后等的相關(guān)性，探討其能否可作為膀胱癌早期珍斷的標(biāo)志物。方法：一：選取5 株不同病理分級(jí)的膀胱尿路上皮癌細(xì)胞株R T - 4 ( T 2 ，( ；1 )T c c —S u p ( T 4 ， 6 2 ) ，K K 4 7 ( T 3 ， G 2 ) T 2 4 ( T 4 ， G 3 ) 5 6 3 7 ( T 4 ，G 3 )及人膀胱上皮永生化細(xì)胞株S V - H U C - 1 作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。細(xì)胞培養(yǎng)后收集細(xì)

6、胞，提取蛋白，用B C A 法進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)，用W e s t e r nb l o t 方法檢測(cè)蛋白質(zhì)樣品中干細(xì)胞標(biāo)志物O C T 4 的表達(dá)情況，使用化學(xué)發(fā)光法，以等量的B - a c t i n 蛋白質(zhì)作對(duì)照，分析表達(dá)差異性。提取R N A 后使用試劑盒進(jìn)行R T - P C R ，讀取吸光度，制作溶解曲線，以目的基因與G A P D H 的比值進(jìn)行定量分析。二：為檢測(cè)O C T 4 在膀胱癌中的表達(dá)，我們共收集4 6 例完整切