Cathepsin L新型抑制劑Clik148對(duì)大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞死亡的機(jī)制.pdf

1、目的：
　　 觀察Cathepsin L新型抑制劑Clik148對(duì)大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其保護(hù)缺血缺氧性星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的機(jī)制：抑制Cathepsin L-Caspase信號(hào)機(jī)制的激活。
　　 方法：
　　 采用大鼠永久性大腦中動(dòng)脈阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO)方法，建立腦缺血的大體模型。大鼠腦缺血前10min或缺血后6h側(cè)腦室

2、給予Clik148，以腦梗塞體積和行為學(xué)癥狀等指標(biāo)以及Western blot法檢測(cè)Clik148對(duì)缺血皮層MAP2蛋白表達(dá)水平的影響來(lái)評(píng)價(jià)Clik148對(duì)腦缺血性損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。采用原代培養(yǎng)大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)方法，建立腦缺血的細(xì)胞模型。免疫熒光法和LDH法分別檢測(cè)OGD誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和乳酸脫氫酶漏出率；采用Westem Blot法和免疫

3、組化法檢測(cè)體內(nèi)和體外缺血缺氧對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞Cathepsin L和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，以及Clik148對(duì)Cathepsin L和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 在大鼠局灶性腦缺血體內(nèi)模型中，Clik148(12.5、25、50nmol)可顯著減小腦梗塞體積和改善行為學(xué)體征以及上調(diào)缺血皮層MAP2、GFAP蛋白的表達(dá)水平(P＜0.01)。在大鼠新生鼠的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪的體外缺血模型，LDH結(jié)果顯示：

4、Clik148(25、50、100μM)劑量依賴性地降低氧糖剝奪引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞LDH漏出率(P＜0．01)，可顯著增加星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目(P＜0.01)。Clik148對(duì)未進(jìn)行氧糖剝奪處理的星形膠質(zhì)細(xì)胞沒(méi)有任何影響。Clik148同樣能夠上調(diào)星形膠質(zhì)細(xì)胞中GFAP蛋白表達(dá)。在體內(nèi)pMCAO大鼠誘導(dǎo)的缺血模型中，Western Blot結(jié)果顯示：大鼠大腦缺血皮層活性Cathepsin L、tBid、Caspase-3上調(diào)以及線粒體

5、的Cyt-c下調(diào)和細(xì)胞漿中Cyt-c上調(diào)。Clik148給藥組可對(duì)抗大鼠局灶性腦缺血模型大鼠缺血皮層中活性Cathepsin L、tBid、Caspase-3的上調(diào)以及線粒體內(nèi)的Cyt-c下調(diào)和細(xì)胞漿中Cyt-c上調(diào)。免疫組化結(jié)果顯示：大鼠大腦缺血皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞中Cathepsin L從溶酶體釋放到細(xì)胞質(zhì)中以及Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞增多；Clik148給藥組可抑制大腦缺血皮層中Cathepsin L釋放以及Caspase-3的陽(yáng)性

6、細(xì)胞數(shù)目。在OGD誘導(dǎo)的體外缺血模型中，Western Blot結(jié)果顯示：星形膠質(zhì)細(xì)胞在OGD后，活性Cathepsin L、tBid、Caspase-3上調(diào)以及線粒體的Cyt-c下調(diào)和細(xì)胞漿中Cyt-c上調(diào)。Westem Blot結(jié)果亦顯示：Clik148可對(duì)抗OGD引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞中活性Cathepsin L、tBid、Caspase-3和Cyt-c蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)論：
　　 Cathepsin L新型抑