2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:為MS2噬菌體替代脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型(PV-Ⅰ)疫苗株作為指示病毒用于消毒劑效果評價提供進(jìn)一步的理論和實驗依據(jù),試驗觀察MS2噬菌體的部分生物學(xué)特性以及對二氯異氰尿酸鈉消毒劑(NaDDC)的抵抗力,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究二氯異氰尿酸鈉作用MS2噬菌體的滅活機(jī)理。 方法: 1.MS2噬菌體的部分生物學(xué)特性研究 1.1 MS2噬菌體增殖特性的研究:方法參照文獻(xiàn)作適當(dāng)改動進(jìn)行研究。按照感染復(fù)數(shù)(MOI)分別為0.

2、0001、0.001、0.01、0.1、1和10加入噬菌體純培養(yǎng)液和宿主菌,37℃160r/min培養(yǎng)4h后,測定噬菌體滴度;加入噬菌體及宿主菌,使MOI=10,37℃溫育15 min后,進(jìn)行一步生長實驗,于各時間取樣300μl測定上清中噬菌體滴度; 1.2 MS2噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)的研究:參照Lu等的方法,略有改動。 1.3 MS2噬菌體的宿主菌范圍研究:主要采用雙層瓊脂法測定MS2噬菌體對各試驗菌株的感染裂解情況,觀

3、察MS2噬菌體的噬菌斑生長情況并計數(shù),并初步比較MS2噬菌體在相關(guān)宿主菌內(nèi)的易感性。 1.4 MS2噬菌體對消毒劑抵抗力的研究:采用懸液定量滅活試驗、中和劑鑒定試驗、噬菌體的檢測采用雙層瓊脂法,實驗參照消毒技術(shù)規(guī)范(2002版)規(guī)定,并作適當(dāng)修改;選擇二氯異氰尿酸鈉消毒劑,觀察其滅活MS2噬菌體的效果。 2.二氯異氰尿酸鈉消毒劑滅活MS2噬菌體機(jī)理的研究 2.1 NaDDC消毒劑對MS2噬菌體核酸影響的研究:采用

4、RT-PCR技術(shù),使用prime premier軟件設(shè)計引物,并通過blastn比對以及預(yù)試驗檢驗引物特異性,觀察消毒劑滅活MS2噬菌體后,其四個基因是否發(fā)生改變; 2.2 NaDDC消毒劑對MS2噬菌體結(jié)構(gòu)蛋白影響的研究:使用透射電鏡觀察消毒劑滅活MS2噬菌體后,病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生改變,病毒對性菌毛的吸附性是否仍然存在;采用血清中和試驗觀察MS2噬菌體經(jīng)二氯異氰尿酸鈉作用后,是否喪失抗原性。方法分別參考相關(guān)文獻(xiàn),并做改進(jìn)。

5、 結(jié)果: 1.MS2噬菌體的部分生物學(xué)特性研究 1.1 MS2噬菌體的增殖特性:一步生長曲線結(jié)果表明MS2噬菌體感染宿主菌大腸桿菌ATCC15779的潛伏時間約為20min,爆發(fā)時間約為90min,裂解量為77; 1.2 MS2噬菌體最佳感染復(fù)數(shù):MS2噬菌體感染其宿主菌的最佳感染復(fù)數(shù)在0.001~0.01之間; 1.3 MS2噬菌體的宿主菌范圍:宿主菌范圍研究中選擇的八種細(xì)菌中,大腸桿菌ATCC

6、15597、大腸桿菌285和大腸桿菌B這三種菌為MS2噬菌體的宿主菌,MS2噬菌體對這三種宿主菌易感性由高到低順序為:大腸桿菌ATCC 15597>大腸桿菌285>大腸桿菌B。 1.4 MS2噬菌體對消毒劑的抵抗力:消毒劑滅活MS2噬菌體結(jié)果如下,300mg/L的二氯異氰尿酸鈉與MS2噬菌體作用40min,MS2的LIV為2.14Log10;400mg/L的二氯異氰尿酸鈉與MS2噬菌體作用40min LIV為2.60Log10;

7、500mg/L的二氯異氰尿酸鈉與MS2噬菌體作用20min LIV可達(dá)到4.39Log10:600mg/L的二氯異氰尿酸鈉與MS2噬菌體作用5min LIV分別可達(dá)到5.33 Log10;700mg/L的二氯異氰尿酸鈉與MS2噬菌體作用5min的LIV為>5.80Log10。 2.二氯異氰尿酸鈉消毒劑滅活MS2噬菌體機(jī)理的研究 2.1 NaDDC消毒劑對MS2噬菌體核酸影響的研究:RT-PCR試驗結(jié)果表明,完全滅活的60

8、0mg/L 10min和800mg/L5min兩個消毒劑濃度滅活MS2噬菌體后,其四個基因均被破壞; 2.2 NaDDC消毒劑對MS2噬菌體結(jié)構(gòu)蛋白影響的研究:MS2噬菌體被完全滅活后,在電鏡下觀察到,MS2斷裂成直徑約10nm大小的不規(guī)則的圓形碎片,喪失吸附能力,無法吸附在宿主菌性菌毛上。對MS2噬菌體抗原性影響的血清學(xué)實驗:MS2噬菌體被完全滅活后,喪失其抗原性。 結(jié)論: 1.MS2噬菌體的部分生物學(xué)特性研究

9、 1.1 MS2噬菌體感染宿主菌大腸桿菌ATCC15779的潛伏時間短; 1.2 最佳感染復(fù)數(shù)在0.001~0.01之間; 1.3 對宿主菌大腸桿菌ATCC15779的易感性最高; 1.4 二氯異氰尿酸鈉對MS2噬菌體可起到良好的滅活作用。 2.二氯異氰尿酸鈉消毒劑滅活MS2噬菌體機(jī)理的研究 2.1 二氯異氰尿酸鈉滅活MS2噬菌體后,其四個基因均被破壞: 2.2 蛋白質(zhì)外殼的形態(tài)發(fā)

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