基于MS2噬菌體病毒樣顆粒的流感病毒系列核酸檢測(cè)質(zhì)控品的研究.pdf

1、流行性感冒是由流行性感冒病毒(Influenza Viruses)引起的急性呼吸道傳染病，據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年有約25萬(wàn)到50萬(wàn)人死于流行性感冒，因此，流行性感冒病毒嚴(yán)重威脅著人類的公共衛(wèi)生安全。開(kāi)展流感監(jiān)測(cè)能及時(shí)發(fā)現(xiàn)、評(píng)估流感疫情，是控制流感流行或大流行的重要手段。目前，全國(guó)范圍內(nèi)已經(jīng)建立起以流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室和流感哨點(diǎn)醫(yī)院為基礎(chǔ)的流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)。
　　本研究針對(duì)公共衛(wèi)生安全威脅較大的8種流感病毒(A/H1N1-2009亞型、季節(jié)性A/

2、H1N1亞型、A/H3N2亞型、A/H5N1亞型、A/H7N9亞型、A/H9N2亞型、B/Yamagata和B/Victoria譜系流感病毒），采用MS2噬菌體病毒樣顆粒包裝平臺(tái)，將各亞型/譜系流感病毒核酸檢測(cè)的靶基因（血凝素基因、神經(jīng)氨酸酶基因、基質(zhì)蛋白基因、核蛋白基因、非結(jié)構(gòu)蛋白基因）分別包入MS2噬菌體衣殼蛋白內(nèi)部，制備了37種的病毒樣顆粒作為流感病毒核酸檢測(cè)模擬樣本。為探討流感病毒核酸檢測(cè)試劑與其它人患病毒間的交叉反應(yīng)情況，同時(shí)

3、制備包裹麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和丙肝病毒核酸檢測(cè)序列的病毒樣顆粒3種，作為流感病毒核酸檢測(cè)質(zhì)評(píng)樣本盤中的陰性樣本，以檢測(cè)流感病毒核酸檢測(cè)試劑是否存在交叉反應(yīng)。使用數(shù)字PCR方法對(duì)使用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的病毒樣顆粒進(jìn)行核酸絕對(duì)定量，而后按比例稀釋制備流感病毒核酸檢測(cè)質(zhì)評(píng)樣本盤，包括26種病毒樣顆粒制備的不同濃度的流感病毒核酸陽(yáng)性模擬樣本，1個(gè)真實(shí)A/H3N2亞型流感咽拭子樣本和3個(gè)流感病毒核酸陰性樣本。
　　共有35個(gè)參加流感病毒核酸檢測(cè)

4、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室回報(bào)了結(jié)果，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室均使用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法，但提取試劑和檢測(cè)試劑不盡相同，陰性樣本的假陽(yáng)性率為0％(0/957)，陽(yáng)性樣本檢測(cè)的假陰性率為0.87％(14/1614)，錯(cuò)誤率為1.3％(21/1614)。本次室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的結(jié)果表明，所研制的8種流感病毒核酸檢測(cè)質(zhì)控品，穩(wěn)定可靠，成功地應(yīng)用于全國(guó)流感病毒核酸檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)。質(zhì)評(píng)結(jié)果表明，國(guó)內(nèi)大多數(shù)流感病毒核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室具備已開(kāi)展項(xiàng)目的流感病毒核酸檢測(cè)能