三氯異氰尿酸對斑馬魚毒性靶器官及效應分子的篩選.pdf

1、目的:本論文研究了三氯異氰尿酸對斑馬魚的急性毒性效應。從人群資料分析氯化消毒劑及其副產(chǎn)物與疾病相關的流行病學特征，從動物、器官、細胞及分子水平，測定三氯異氰尿酸對斑馬魚的急性毒性，鑒定三氯異氰尿酸可能的毒性靶器官，篩選三氯異氰尿酸致靶器官早期損傷的效應分子，為三氯異氰尿酸的人群暴露風險評估提供數(shù)據(jù)，并對三氯異氰尿酸的毒性效應機制進行了探索。
　　方法:1.文獻綜述三氯異氰尿酸及氯化消毒副產(chǎn)物及其相關疾病的流行病學概況，為實驗提供流

2、行病學依據(jù)。2.用不同濃度的三氯異氰尿酸溶液暴露斑馬魚，觀察急性毒性反應，確定三氯異氰尿酸對斑馬魚的96h半數(shù)致死濃度(LC50)。3.根據(jù)三氯異氰尿酸對斑馬魚的96h半數(shù)致死濃度，設計暴露劑量。分別觀察暴露后斑馬魚的腦、肝臟、精巢和卵巢等組織器官的病理變化，初步篩選出三氯異氰尿酸對斑馬魚急性損傷的靶器官。4.通過病理組織切片和透射電鏡觀察靶器官肝臟細胞的形態(tài)學變化，輔助確定靶器官。5.暴露24h后，取肝臟組織，雙向熒光差異電泳結(jié)合質(zhì)譜

3、成像技術MALDI-TOF/TOF-MS分析篩選差異蛋白，并且鑒定差異蛋白及其功能。6.對經(jīng)過篩選鑒定出的差異蛋白質(zhì)蛋進行相關生物信息學分析。7.用蛋白印記法驗證差異蛋白表達量。從而在分子水平上，用蛋白質(zhì)組學的方法分析三氯異氰尿酸對斑馬魚的急性毒作用的效應分子。
　　結(jié)果:1.我們研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，斑馬魚對不同濃度三氯異氰尿酸的急性毒性反應不同。三氯異氰尿酸對斑馬魚的96h半數(shù)致死濃度為551.056μg/L。2.三氯異氰尿酸對斑馬魚

4、的腦、精巢、卵巢的毒性作用不明顯。3.三氯異氰尿酸對斑馬魚肝臟造成急性損傷，損傷隨著染毒濃度的增高而增大的趨勢。初步篩選出肝臟是三氯異氰尿酸毒性作用的主要靶器官之一。4.三氯異氰尿酸暴露引起斑馬魚肝臟組織發(fā)生細胞凋亡、組織充血、組織形成部分空洞等病理變化，細胞核和線粒體病變最嚴重，可能引起斑馬魚發(fā)生疾病和死亡，并且隨著染毒濃度增加，損傷也逐漸增大。5.經(jīng)過雙向熒光差異電泳技術和質(zhì)譜鑒定，我們發(fā)現(xiàn)了BHMT、HPDA、FABP10A、AL

5、DOB等表達差異蛋白。6.三氯異氰尿酸會造成斑馬魚肝臟組織細胞中的BHMT蛋白的表達抑制。
　　結(jié)論:1.三氯異氰尿酸對斑馬魚急性毒性根據(jù)《全球化學品分類和標簽協(xié)調(diào)手冊》(The Globally Harmonized System of Classification&Labelling of Chemicals，GSH)以LC50為標準分類，屬于高毒物質(zhì)。2.經(jīng)三氯異氰尿酸暴露后，斑馬魚腦、精巢和卵巢病理變化不明顯，肝臟可能是三