MicroRNA調(diào)控鼻咽癌hTERT基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文觀察microRNA(miRNA)對鼻咽癌細(xì)胞株的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)基因表達(dá)及其增殖和凋亡的影響，為鼻咽癌的基因治療奠定一定的基礎(chǔ)。文中利用體外已構(gòu)建好的靶向hTERT基因的miRNA，表達(dá)質(zhì)粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE-2細(xì)胞，建立穩(wěn)定表達(dá)該質(zhì)粒的細(xì)胞系，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptasepolymerase chain reaction，RT-

2、PCR)和Westem Blotting方法分別檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中hTERT基因的mRNA水平及觀察miRNA干擾后hTERT蛋白表達(dá)水平，并通過CCK-8比色法和流式細(xì)胞術(shù)，分別檢測靶向hTERT基因的miRNA對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 研究結(jié)果表明：靶向hTERT基因miRNA表達(dá)質(zhì)粒，在鼻咽癌CNE-2細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)靶向hTERT基因的miRNA的質(zhì)粒后，CNE-2細(xì)胞的hTERT基因mRNA水平下調(diào)72.8﹪

3、；hTERT基因的蛋白表達(dá)水平下調(diào)75.5﹪；細(xì)胞增殖受到抑制，72h細(xì)胞增殖抑制率達(dá)51.1﹪；細(xì)胞凋亡增多，凋亡率達(dá)46.1﹪。 研究結(jié)論：1.靶向hTERT基因的miRNA質(zhì)粒，在體外能成功轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE-2細(xì)胞并穩(wěn)定表達(dá)。2.靶向hTERT基因的miRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE-2細(xì)胞后能下調(diào)hTERT基因mRNA和蛋白表達(dá)水平。3.靶向hTERT基因的miRNA可在鼻咽癌中發(fā)揮RNA干擾效應(yīng)，抑制癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡