原代自體表皮細胞移植治療燒傷的實驗研究.pdf

1、目的：1.為了尋求最佳的分離條件，設計不同胰蛋白酶濃度、不同消化時間分離大鼠表皮細胞。2.在進行大鼠表皮細胞的最佳分離條件的基礎上，探討皮膚面積與表皮細胞數(shù)量的關(guān)聯(lián)性。并測定表皮細胞的面積。3.制作大鼠Ⅲ度燒傷模型，在前面工作的基礎上，設定不同的移植密度治療大鼠燒傷創(chuàng)面，并觀察創(chuàng)面愈合情況。探討原代自體表皮細胞移植治療燒傷的可行性，適宜的移植密度。 方法：1.最佳分離條件的測定采用3個不同消化酶濃度和3個不同的消化時間，設為9組

2、。免疫細胞染色鑒定，臺盼藍進行活細胞計數(shù)。通過MTT法間接測定活力細胞的數(shù)量，通過正交分析判定最佳的消化酶濃度和消化時間，即最佳分離條件。2.在最佳分離條件下分別消化不同面積的大鼠皮膚，分為5組，統(tǒng)計學分析皮膚面積與表皮細胞數(shù)量之間的關(guān)聯(lián)性。在24孔板里培養(yǎng)一定數(shù)量的表皮細胞，用顯微測微尺測定細胞面積。3.建立大鼠燒傷模型，分為治療組(A、B、C)和對照組(D)。治療組采用不同細胞移植密度治療，A組：6.0×104/cm2；B組：1.2

3、×105/cm2；C組：2.4×105c/m2。術(shù)后觀察各組大鼠的創(chuàng)面的愈合情況，觀察并記錄各組大鼠創(chuàng)面瘢痕愈合數(shù)量和收縮比例等。 結(jié)果：1、消化得到的細胞經(jīng)免疫染色證實了分離出的細胞為表皮細胞。未貼壁時細胞呈圓球型，貼壁后呈多角形，培養(yǎng)后呈鋪路石樣特征，為表皮細胞典型特征。各組臺盼藍染色活細胞計數(shù)；MTT法測定活力細胞數(shù)量，兩個計數(shù)結(jié)果均經(jīng)統(tǒng)計學正交分析分析證實：最佳的消化酶濃度和時間是0.25％胰蛋白酶，16小時，即最佳分離

4、條件。2、不同面積大鼠皮膚經(jīng)最佳分離條件消化后分離得到的表皮細胞，經(jīng)統(tǒng)計學分析顯示，皮膚面積與表皮細胞成線性相關(guān)，并得到線性方程。表皮細胞接種到24孔板后，用顯微測微尺測量細胞參數(shù)，得到表皮細胞面積6540±450um2。3、移植后A組死亡一只，B組和C組均因感染導致移植失敗各一只。A組瘢痕愈合數(shù)9例；B組瘢痕愈合數(shù)1例；C組瘢痕愈合0例；D組均為瘢痕愈合15例。在創(chuàng)面收縮比例上D組達84.5％，A、B、C組分別為34.3％、20.1％

5、、18.9％。經(jīng)統(tǒng)計學分析瘢痕愈合：BC組間差異無統(tǒng)計學意義，其余各組間差異均有意義；收縮比例：BC組間差異無統(tǒng)計學意義，其余各組間差異均有意義。 結(jié)論：1.胰蛋白酶-EDTA消化法可以成功分離表皮細胞，經(jīng)鑒定為表皮細胞，并經(jīng)培養(yǎng)證實形態(tài)和功能良好。正交分析結(jié)果提示：在冷消化法中最佳的消化酶濃度和消化時間是0.25％胰蛋白酶0.04％EDTA(1：1)，16小時。冷消化法真皮刮除法最佳的分離條件是以上的消化酶濃度和時間。2.實驗