自體表皮細(xì)胞-纖維蛋白膜創(chuàng)面移植治療燒傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.為了解決單純表皮細(xì)胞懸液移植流動(dòng)性大，不能在創(chuàng)面均勻分布影響治療效果，提出應(yīng)用纖維蛋白膜作為培養(yǎng)表皮細(xì)胞的基質(zhì)。2.在進(jìn)行大鼠表皮細(xì)胞的分離和培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，探討表皮細(xì)胞的生長特性，找出在纖維蛋白膜上最合適的表皮細(xì)胞接種密度，并觀察表皮細(xì)胞在其上面的的生長情況。3.利用構(gòu)造出的自體表皮細(xì)胞-纖維蛋白膜移植到大鼠燒傷皮膚缺損創(chuàng)面，探討自體表皮細(xì)胞-纖維蛋白膜移植治療大面積燒傷皮膚缺損的可行性。 方法：1.纖維蛋白膜的制(采

2、用一定濃度的凝血酶和等體積血漿混合的方法使纖維蛋白凝固，血漿與凝血酶之為1ml:10IU、1ml:50IU和1ml:100IU。用螺旋測(cè)微器來測(cè)量纖維蛋白膜的厚度。纖維蛋白膜的抗張強(qiáng)度及伸長率的測(cè)定：在分析儀上進(jìn)行測(cè)量，用公式S=P/(AxB)和L=(L2-L1)/L1來進(jìn)行計(jì)算。纖維蛋白膜的生物相容性的實(shí)驗(yàn)采用直接觀察和組織學(xué)的方法2.采用大鼠表皮胰蛋白酶消化法進(jìn)行細(xì)胞的分離，用臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)表皮細(xì)胞活力，并將表皮細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶內(nèi)培

3、養(yǎng)。同時(shí)進(jìn)行表皮細(xì)胞的免疫組織化學(xué)染色來鑒定表皮細(xì)胞。光鏡下觀察原代培養(yǎng)表皮細(xì)胞的形態(tài)變化和生長情況。通過表皮細(xì)胞貼壁率的比較找出在纖維蛋白膜上最佳的的表皮細(xì)胞接種密度。并在纖維蛋白膜上觀察表皮細(xì)胞形態(tài)變化。3.建立大鼠皮膚缺損模型，分為對(duì)照組和自體表皮細(xì)胞.纖維蛋白膜移植組。術(shù)后觀察大鼠的精神狀態(tài)和皮膚缺損創(chuàng)面的愈合情況，記錄兩組大鼠皮膚缺損創(chuàng)面愈合的時(shí)間，計(jì)算創(chuàng)面的收縮率，同時(shí)進(jìn)行比較創(chuàng)面愈合后出現(xiàn)瘢痕的情況。 結(jié)果：1、通

4、過實(shí)驗(yàn)得出用稀釋比例為1ml:50IU的凝血酶溶液制備的纖維蛋白膜的物理性能最好。纖維蛋白膜具有良好的的生物相容性和降解性。2、大鼠表皮經(jīng)0.25％胰蛋白酶消化后分離出的表皮細(xì)胞的數(shù)量和活力均較好。表皮細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶后，開始的時(shí)候細(xì)胞呈圓形，單個(gè)或成團(tuán)懸浮于培養(yǎng)基中，4～6h后便以單個(gè)或細(xì)胞團(tuán)簇沉于瓶底，24h后大部分的表皮細(xì)胞開始貼附于瓶底生長。表皮細(xì)胞貼壁后成多角形，細(xì)胞核成圓形，細(xì)胞外觀透明，呈典型的鋪路石樣生長。表皮細(xì)胞抗角蛋

5、白抗體染色陽性，抗波形蛋白抗體染色陰性，證實(shí)了本實(shí)驗(yàn)中所分離出的細(xì)胞為表皮細(xì)胞。通過比較不同接種密度下表皮細(xì)胞的貼壁率，發(fā)現(xiàn)表皮細(xì)胞在纖維蛋白膜上更容易貼壁生長，在纖維蛋白膜上表皮細(xì)胞的適合接種密度為5×104/cm2。剛接種到纖維蛋白膜上的表皮細(xì)胞細(xì)胞呈圓形，單個(gè)或幾個(gè)細(xì)胞成團(tuán)呈懸浮狀態(tài)，24h后大部分的表皮細(xì)胞已經(jīng)貼附于纖維蛋白膜上，48h時(shí)貼壁的表皮細(xì)胞變大，向四周鋪展，72h時(shí)部分細(xì)胞出現(xiàn)死亡，培養(yǎng)基中可見到有漂浮的圓形細(xì)胞。3

6、、兩組大鼠手術(shù)后的狀態(tài)良好。B組的大鼠的創(chuàng)面愈合良好，無結(jié)痂的出現(xiàn)。A組的大鼠的傷口在愈合的過程中，術(shù)后的第二日起就開始結(jié)痂，最終為瘢痕愈合。在創(chuàng)面愈合時(shí)間上，B組的大鼠明顯比A組的大鼠的創(chuàng)面愈合時(shí)間要短。同時(shí)，在愈合后兩組大鼠創(chuàng)面收縮率的比較中，A組的大鼠創(chuàng)面愈合后收縮明顯，而B組的大鼠創(chuàng)面僅僅是略有收縮。A組大鼠最終創(chuàng)面愈合的方式為瘢痕愈合，B組大鼠的創(chuàng)面因?yàn)橛幸浦驳淖泽w的表皮細(xì)胞在創(chuàng)面上生長增殖，愈合之后未見有嚴(yán)重瘢痕組織的出現(xiàn)。

7、 結(jié)論：1、纖維蛋白膜是血漿中的纖維蛋白原在凝血酶催化下產(chǎn)生的，它是一種可合成的，可降解的，無毒、無副作用，有良好生物相容性，對(duì)機(jī)體無害的生物材料。2、通過表皮胰蛋白酶消化法可以得到數(shù)量足夠多且細(xì)胞活力良好的表皮細(xì)胞。接種到纖維蛋白膜上的表皮細(xì)胞可以正常生長，兩者可以聯(lián)合得到表皮細(xì)胞-纖維蛋白膜。3、纖維蛋白膜可以促進(jìn)表皮細(xì)胞的貼壁率，在纖維蛋白膜表面接種表皮細(xì)胞的最佳密度為5×104/cm2。4、自體表皮細(xì)胞-纖維蛋白膜在移植