飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)肺癌差異蛋白的研究.pdf

1、目的：本研究應(yīng)用表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)技術(shù)篩選出肺癌血清、肺泡灌洗液(BALF)和肺癌組織差異蛋白，找出蛋白與肺癌的關(guān)系，并探討其意義。 方法：應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)通過(guò)弱陽(yáng)離子交換蛋白芯片(WCX-2芯片)分別檢測(cè)20例肺癌患者和10例肺良性病變患者的血清、肺泡灌洗液(BALF)和肺組織勻漿中的蛋白質(zhì)圖譜，采用Protein Chip Biomarker System II-C型

2、蛋白質(zhì)芯片閱讀儀讀取芯片信息，采用Ciphergen Protein Chip3.2版本的分析軟件自動(dòng)采集數(shù)據(jù)，讀取峰高值，獲得蛋白表達(dá)圖譜，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。用Biomarker Pattern軟件分析NSCLC差異蛋白并初步建立診斷模型。通過(guò)盲篩進(jìn)一步驗(yàn)證診斷模型。 結(jié)果：肺癌患者與肺良性病變患者相比較，蛋白質(zhì)有以下差別：(1)血清：發(fā)現(xiàn)20個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的蛋白峰，其中肺癌患者血清中顯著高表達(dá)蛋白質(zhì)波峰有14個(gè)(P<0.05)

3、，質(zhì)荷比(M/Z)分別是3270.07Da，4095.44Da,5309.20Da,5340.15Da,5852.02Da,5906.89Da,6436.01Da,6632.41Da,6933.33Da,7768.18Da,7973.40Da,8065.61Da,8691.12Da,8142.28Da;顯著低表達(dá)蛋白質(zhì)波峰有6個(gè)(P<0.05)，MZ分別是2014.68 Da，2137.45 Da，2280.16Da,2503.32Da

4、,3588.92 Da,2090.78Da;采用Biomarker Pattern Software(BPS)對(duì)經(jīng)過(guò)Biomarker Wizard Software獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，通過(guò)選用M/Z為2090.77 Da和2503.31 Da的差異蛋白峰建立分類樹(shù)模型，其診斷的靈敏度為90％，特異度為100％。盲篩驗(yàn)證結(jié)果顯示，其靈敏度為90％，特異度為100％，粗符合率(crude accuracy，CA)為93.33％，You

5、den指數(shù)(Youdens index，γ)為0.9。 (2) BALF:發(fā)現(xiàn)18個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的蛋白峰，其中肺癌組BALF中顯著高表達(dá)蛋白峰有4個(gè)(P<0.05)，M/Z分別是7280.59 Da，7766.12Da，7824.82Da，11510.51Da;顯著低表達(dá)蛋白質(zhì)波峰有14個(gè)(P<0.05)，M/Z分別是2368.58Da,2382.53Da,2618.62Da,3377.17Da,3448.29Da,3494.1

6、1Da,3512.82Da,4140.77Da,4996.49Da,5426.08Da,6925.46Da,10837.31Da,13160.91Da，12691.68Da。通過(guò)選用M/Z2611.61 Da和3252.80 Da的差異蛋白峰建立分類樹(shù)模型，其診斷的靈敏度為100％，特異度為100％。盲篩驗(yàn)證結(jié)果顯示，其靈敏度為95％，特異度為100％，CA為96.67％，γ為0.97。 (3)肺癌組織勻漿：發(fā)現(xiàn)11個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差

7、異的蛋白峰，其中肺癌組織勻漿中顯著高表達(dá)蛋白質(zhì)波峰有3個(gè)(P<0.05)，M/Z分別是4230.06Da，5757.93Da，11497.18Da;顯著低表達(dá)蛋白質(zhì)波峰有8個(gè)(P<0.05)，M/Z分別是2301.92Da，2315.62Da,2331.54Da,2488.96Da,3507.10Da,3525.91Da,4770.84Da,4742.71Da。通過(guò)選用M/Z為5757.92 Da、4742.71 Da的差異蛋白峰建立分

8、類樹(shù)模型，其診斷的靈敏度為90％，特異度為100％。盲篩驗(yàn)證結(jié)果顯示，其靈敏度為90％，特異度為100％，CA為93.33％，γ為0.9。經(jīng)平行試驗(yàn)(parallel test)，上述盲篩試驗(yàn)中，30例患者中有20例被判為肺癌患者，10例被判為肺良性病變患者。根據(jù)病理結(jié)果，20例肺癌患者中20例被準(zhǔn)確判斷，10例肺良性病變患者10例被準(zhǔn)確判斷，沒(méi)有誤判。 結(jié)論：(1)SELDI-TOF-MS技術(shù)篩選出的肺癌患者相對(duì)特異的蛋白標(biāo)記