基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜快速鑒別耐藥細(xì)菌的研究.pdf

1、目的：評價基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF MS）VITEK MS對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和耐萬古霉素屎腸球菌的快速鑒別能力。
　　方法：收集279株金黃色葡萄球菌臨床分離株，應(yīng)用VITEK MS質(zhì)譜儀鑒定菌種，苯唑西林和頭孢西丁紙片擴(kuò)散法初篩耐藥菌株，聚

2、合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測mecA基因。采用VITEK MS建立甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）的數(shù)據(jù)庫(SuperSpectra)，獲得兩組用于區(qū)分的特征峰，并應(yīng)用臨床菌株對新建立的SuperSpectra進(jìn)行驗證。
　　同樣收集196株屎腸球菌臨床菌株，VITEK MS進(jìn)行菌種鑒定，萬古霉素和替考拉寧紙片擴(kuò)散法初篩耐藥菌株，PCR檢測萬古霉素耐藥基因(包括vanA、vanB和van

3、M)。采用VITEK MS建立萬古霉素耐藥屎腸球菌（VRE）和萬古霉素敏感屎腸球菌（VSE）的SuperSpectra，獲得兩組用于區(qū)分的特征峰，并應(yīng)用臨床菌株對新建立的SuperSpectra進(jìn)行驗證。
　　結(jié)果：收集的279株金黃色葡萄球菌臨床菌株中275株經(jīng)VITEK MS確認(rèn)為金黃色葡萄球菌，其中143株經(jīng)紙片法藥物敏感性和PCR擴(kuò)增試驗證實為甲氧西林耐藥且攜帶mecA基因，132株為甲氧西林敏感菌株且不攜帶mecA基因，

4、紙片擴(kuò)散法和mecA基因檢測符合率為100％。隨機(jī)采集66株MRSA臨床菌株和1株標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC43300的質(zhì)譜指紋圖譜建立MRSA SuperSpectra，隨機(jī)采集64株MSSA臨床菌株和2株標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC25923、ATCC29213）的質(zhì)譜指紋圖譜建立MSSA SuperSpectra，比對MRSA和MSSA SuperSpectra得到兩個質(zhì)荷比為2305.6Da和3007.3Da的MRSA特征峰，而質(zhì)荷比為6816.7

5、Da的峰為MSSA特有的響應(yīng)值較高的峰，驗證結(jié)果顯示該方法對MRSA鑒定準(zhǔn)確率達(dá)84.21%，對MSSA的鑒定準(zhǔn)確率達(dá)90.91%，對于金黃色葡萄球菌是否耐藥的鑒定總的準(zhǔn)確率為87.32%。
　　收集的196株屎腸球菌臨床菌株經(jīng)質(zhì)譜鑒定均為屎腸球菌，其中105株經(jīng)紙片法藥物敏感性和PCR擴(kuò)增試驗證實為VRE（66株攜帶vanA基因，39株攜帶vanM基因），91株為敏感菌株，紙片擴(kuò)散法和PCR結(jié)果符合率為100%。隨機(jī)采集62株臨

6、床耐藥株和58株臨床敏感株的質(zhì)譜指紋圖譜分別建立 VRE SuperSpectra和 VSE SuperSpectra，比對兩個SuperSpectra發(fā)現(xiàn)，6601.4 Da處的峰為VRE特征峰，而3723.9 Da和3883.1 Da處的峰為VSE的兩個特征峰，臨床菌株驗證表明該方法對VRE的鑒定準(zhǔn)確率為88.37%，VSE準(zhǔn)確率為75.76%，對于屎腸球菌是否耐藥的總鑒定準(zhǔn)確率為82.89%。
　　結(jié)論：VITEK MS可以