E-cadherin在白血病細(xì)胞的表達(dá).pdf

1、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)，又稱為桑椹胚黏著蛋白(Uvomorulin)，是Ca<'2+>依賴性細(xì)胞黏附分子超家族成員之一，介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞間的黏附。E-cadherin特異表達(dá)于胚胎發(fā)生早期的某些特定階段，促進(jìn)胚胎細(xì)胞的正常增殖、分化和遷移，對(duì)于胚胎的正常發(fā)育和分化起著關(guān)鍵作用。在正常成年人，E-cadherin廣泛表達(dá)于上皮來源的各種組織類型的細(xì)胞，在建立穩(wěn)固的上皮組織連接和維持正常組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定中發(fā)揮重要作用。E-cadhe

2、rin基因CDHI是一個(gè)典型的抑癌基因，在抑制腫瘤發(fā)生中起著重要作用。大量研究資料表明，E-cadherin不僅是一個(gè)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移抑制分子，在腫瘤發(fā)生的早期階段，也發(fā)現(xiàn)了E-cadherin功能失活，因此也是一個(gè)腫瘤發(fā)生抑制分子。 以往關(guān)于E-cadherin的研究主要集中在實(shí)體瘤，尤其是上皮來源的腫瘤。在這些腫瘤中，E-cadherin基因經(jīng)常發(fā)生突變，比如彌散型胃癌和小葉型乳腺癌。在一些家族性彌散型胃癌家系中，也發(fā)現(xiàn)了E-

3、cadherin基因胚系突變。E-cadher·in基因CDH，雜合性缺失(LOH)在一些腫瘤如小葉型乳腺癌中也經(jīng)常發(fā)生。在胃腸癌、乳腺癌、前列腺癌等均發(fā)現(xiàn)E-cadherin基因的高度甲基化。 雖然關(guān)于E-cadherin的研究在實(shí)體瘤中己趨成熟，但是它在造血發(fā)生中的研究才剛開始。文獻(xiàn)報(bào)道E-cadherin表達(dá)于正常人的外周血和骨髓單個(gè)核細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞和CD34+的造血干細(xì)胞，介導(dǎo)了造血細(xì)胞與骨髓微環(huán)境基質(zhì)細(xì)胞及基質(zhì)分子的相

4、互作用。與實(shí)體瘤相同，在白血病細(xì)胞中也可檢測(cè)到E-cadherin基因甲基化，因此推測(cè)DNA甲基化會(huì)導(dǎo)致E-cadherin在白血病細(xì)胞表達(dá)降低，可能促進(jìn)惡性造血的發(fā)生。基于以上認(rèn)識(shí)，本文擬檢測(cè)E-cadherin在白血病細(xì)胞的表達(dá)，并探討其發(fā)生的可能機(jī)制，研究E-cadherin表達(dá)改變對(duì)白血病細(xì)胞行為的影響，確定E-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞黏附機(jī)制改變?cè)诎籽“l(fā)生中的作用。 本研究主要完成了以下工作： 1．白血病患

5、者及白血病細(xì)胞系E．cadherin的表達(dá)：應(yīng)用半定量In：PCR方法檢測(cè)100例白血病患者和23例正常骨髓移植供者骨髓單個(gè)核細(xì)胞的E—cadherin相對(duì)表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)和正常人相比，白血病患者E—cadherin表達(dá)降低或缺失，非配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P值為0.0208，P<0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；應(yīng)用半定量RT-PCR和甲基化特異性PCR、(MSP)方法檢測(cè)各種類型白血病細(xì)胞系E-cadherin的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)所有白血病細(xì)胞系E

6、-cadherin表達(dá)缺失或降低，并且其基因處于完全甲基化狀態(tài)或以甲基化為主的不完全甲基化狀態(tài)。推測(cè)基因甲基化導(dǎo)致E-cadherin在白血病細(xì)胞表達(dá)缺失或降低。 2．E-cadherin的誘導(dǎo)表達(dá)及細(xì)胞行為學(xué)改變：用去甲基化試劑5-Aza-CdR處理E-cadherin完全甲基化的白血病細(xì)胞系U-937， MSP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在合適的5-Aza-CdR作用濃度，部分CDHI基因去甲基化，RT-PCR、流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光標(biāo)記檢測(cè)到部

7、分細(xì)胞在mRNA和蛋白水平恢復(fù)E-cadherin表達(dá)，并且通過E-cadherin特異的細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)5-Aza-CdR處理72h的細(xì)胞比未經(jīng)處理的細(xì)胞粘附能力增強(qiáng)，E-cadherin的調(diào)節(jié)物可逆轉(zhuǎn)5-Aza-CdR誘導(dǎo)后的細(xì)胞黏附，進(jìn)一步證明此黏附增強(qiáng)是由E-cadherin獲得表達(dá)所致。 綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)白血病細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)降低或缺失，其基因的甲基化是重要機(jī)制，去甲基化處理可以重新恢復(fù)部分細(xì)胞E-ca