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文檔簡介
1、有機磷農(nóng)藥毒死蜱(Chlorpyrifos)高效廣譜,在蔬菜、水稻等作物上廣泛使用,尤其是禁止使用有機磷農(nóng)藥高毒品種后,毒死蜱使用更為普遍。有機磷農(nóng)藥殘留污染問題是我國乃至世界食物和環(huán)境中的突出問題。有機磷農(nóng)藥殘留通過人的食物進入食物鏈,并在生物體中進行生物富積,造成致畸、致癌、致突變等危害。本文主要研究有機磷農(nóng)藥殘留的酶降解技術,以施氏假單胞桿菌(Pseudomonas stutzeri)JHY01菌株為主要材料,對菌株的毒死蜱降解酶
2、進行了細胞定位及提取條件的優(yōu)化,研究了降解酶粗酶液的特性,研制粗酶制劑的劑型,并對粗酶制劑的降解效果進行了評價,獲得了如下具體結果: 1.對施氏假單胞桿菌毒死蜱降解酶進行了細胞定位:定位實驗結果表明,胞內(nèi)提取的酶的降解效率最強,30min內(nèi)對40mg/L毒死蜱的降解率高達79.85%;胞外提取的酶的降解效率僅為8.41%。由此推斷,施氏假單胞桿菌JHY01菌株的毒死蜱降解酶位于菌體細胞內(nèi),屬于胞內(nèi)酶。 2.采用L9(34
3、)正交實驗設計優(yōu)化了降解酶的提取條件:以超聲波提取為基礎,通過正交設計優(yōu)化提取條件。結果明確,施氏假單胞桿菌JHY01菌株經(jīng)12天的培養(yǎng),其菌體內(nèi)降解酶的活性最高。采用超聲波破碎儀(Sonics-VCX500,輸出功率為500W,頻率為20kHz)破碎并提取胞內(nèi)酶,最佳提取條件為:菌體重量/緩沖液體積為1g/4ml,每次輻射4s,間隔4s,總輻射次數(shù)為30次,在此條件下提取到的酶的活性最高,降解效率可達到84.47%。 3.明確
4、了施氏假單胞桿菌JHY01菌株粗酶的主要特性:測定結果顯示,施氏假單胞桿菌JHY01菌株的有機磷降解酶為組成型酶,在pH6.0~10.0之間都有較好的降解效果,最適pH為7.2;酶活適宜的溫度范圍為30~50℃,最適溫度為40℃;酶活性易受金屬離子影響,Cu2+、Fe3+、Mn2+對酶活性有一定的抑制作用;粗酶提取液稀釋100倍后沒有降解能力。 4.研制了毒死蜱降解酶粗酶制劑的一個新劑型:對擬參與配伍的潤濕劑、穩(wěn)定劑等進行了一系
5、列篩選,采用正交實驗進行制劑配方的優(yōu)化,實驗結果得劍的最佳配方為:粗酶液含量為50%,酶穩(wěn)定劑為SL,酶穩(wěn)定劑的含量為2%,潤濕劑WS,含量為7.5%,新配制的粗酶水劑于4℃下放置7d,其降解效率可保持在77.65%。粗酶水劑經(jīng)測定,其表面張力約為53.07mN/m2,pH值為7.60,于4℃下冷藏7d,其分解率小于5%。 5.粗酶制劑降解效果的初步評價:煙草對毒死蜱噴霧敏感。采用煙草離體葉片法測試制劑對植物表面污染的修復作用,
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