施氏假單胞桿菌的毒死蜱降解酶的基本特性及其制劑的研究.pdf

1、有機(jī)磷農(nóng)藥毒死蜱(Chlorpyrifos)高效廣譜，在蔬菜、水稻等作物上廣泛使用，尤其是禁止使用有機(jī)磷農(nóng)藥高毒品種后，毒死蜱使用更為普遍。有機(jī)磷農(nóng)藥殘留污染問(wèn)題是我國(guó)乃至世界食物和環(huán)境中的突出問(wèn)題。有機(jī)磷農(nóng)藥殘留通過(guò)人的食物進(jìn)入食物鏈，并在生物體中進(jìn)行生物富積，造成致畸、致癌、致突變等危害。本文主要研究有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的酶降解技術(shù)，以施氏假單胞桿菌(Pseudomonas stutzeri)JHY01菌株為主要材料，對(duì)菌株的毒死蜱降解酶

2、進(jìn)行了細(xì)胞定位及提取條件的優(yōu)化，研究了降解酶粗酶液的特性，研制粗酶制劑的劑型，并對(duì)粗酶制劑的降解效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)，獲得了如下具體結(jié)果： 1.對(duì)施氏假單胞桿菌毒死蜱降解酶進(jìn)行了細(xì)胞定位：定位實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，胞內(nèi)提取的酶的降解效率最強(qiáng)，30min內(nèi)對(duì)40mg/L毒死蜱的降解率高達(dá)79.85％；胞外提取的酶的降解效率僅為8.41％。由此推斷，施氏假單胞桿菌JHY01菌株的毒死蜱降解酶位于菌體細(xì)胞內(nèi)，屬于胞內(nèi)酶。 2.采用L9(34

3、)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化了降解酶的提取條件：以超聲波提取為基礎(chǔ)，通過(guò)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化提取條件。結(jié)果明確，施氏假單胞桿菌JHY01菌株經(jīng)12天的培養(yǎng)，其菌體內(nèi)降解酶的活性最高。采用超聲波破碎儀(Sonics-VCX500，輸出功率為500W，頻率為20kHz)破碎并提取胞內(nèi)酶，最佳提取條件為：菌體重量/緩沖液體積為1g/4ml，每次輻射4s，間隔4s，總輻射次數(shù)為30次，在此條件下提取到的酶的活性最高，降解效率可達(dá)到84.47％。 3.明確

4、了施氏假單胞桿菌JHY01菌株粗酶的主要特性：測(cè)定結(jié)果顯示，施氏假單胞桿菌JHY01菌株的有機(jī)磷降解酶為組成型酶，在pH6.0～10.0之間都有較好的降解效果，最適pH為7.2；酶活適宜的溫度范圍為30～50℃，最適溫度為40℃；酶活性易受金屬離子影響，Cu2+、Fe3+、Mn2+對(duì)酶活性有一定的抑制作用；粗酶提取液稀釋100倍后沒有降解能力。 4.研制了毒死蜱降解酶粗酶制劑的一個(gè)新劑型：對(duì)擬參與配伍的潤(rùn)濕劑、穩(wěn)定劑等進(jìn)行了一系

5、列篩選，采用正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行制劑配方的優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果得劍的最佳配方為：粗酶液含量為50％，酶穩(wěn)定劑為SL，酶穩(wěn)定劑的含量為2％，潤(rùn)濕劑WS，含量為7.5％，新配制的粗酶水劑于4℃下放置7d，其降解效率可保持在77.65％。粗酶水劑經(jīng)測(cè)定，其表面張力約為53.07mN/m2，pH值為7.60，于4℃下冷藏7d，其分解率小于5％。 5.粗酶制劑降解效果的初步評(píng)價(jià)：煙草對(duì)毒死蜱噴霧敏感。采用煙草離體葉片法測(cè)試制劑對(duì)植物表面污染的修復(fù)作用，