KXI對酒精性肝病大鼠TNF-α、PAI-1的影響.pdf

1、目的：酒精性肝病(Alcoholic Liver Disease，ALD)的發(fā)病與多種因素有關(guān)。目前研究較多的有：遺傳因素；免疫學(xué)因素；氧化應(yīng)激等。其中細(xì)胞因子在酒精性肝病發(fā)病機(jī)制中的作用越來越受到重視。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosisfactor-α．TNF-α)是重要的細(xì)胞因子，在ALD的發(fā)病和發(fā)展過程中起到重要的作用。纖溶酶原激活物抑制劑-1(plasminogen activator inhibitortype 1

2、，PAI-1)在化學(xué)性肝纖維化中的表達(dá)已有報導(dǎo)，但在ALD中尚缺乏相關(guān)研究。本實驗通過建立酒精性肝病大鼠模型，觀察不同時期大鼠肝臟的病理、肝纖維化程度與TNF-α、PAI-1定位和動態(tài)變化，進(jìn)一步揭示ALD的發(fā)病機(jī)理，同時也觀察抗纖復(fù)方I號(Kang xian Fu Fang I，KX I)對其表達(dá)的影響，為進(jìn)一步探討酒精性肝病的作用機(jī)制、預(yù)防和臨床治療提供幫助。 實驗方法: 1.酒精性肝病動物模型的制備 雄性W

3、istar大鼠，體重160-190克，隨機(jī)分為三組，每組21只：正常組，正常飲食，給予生理鹽水2.0ml/只，日三次灌胃，共12w。酒精組，給予乙醇日三次灌胃，共12w。其中0-4w，400m l/L乙醇8 g/k g/d；5-8w，500m l/L乙醇9 g/k g/d；9-12w，500m l/L乙醇10 g/k g/d。KX I組，在給予同酒精組等量乙醇的基礎(chǔ)上，給予KX I水煎劑4.0ml/k g/d，日二次灌胃，共12w。

4、 2．肝臟組織病理學(xué)檢測 實驗4w、8w、12w末分批處死動物。固定的肝組織經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，連續(xù)切片5 μm行HE染色，光鏡下觀察肝臟組織病理學(xué)的改變。 3．TNF-α、PAI-1免役組織化學(xué)染色 采用SABC法。TNF-α、PAI-1抗體均為1：100稀釋。結(jié)果測定采用病理圖象分析儀測定陽性面積積分光密度值。 4．統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS11.5軟件，比較采用

5、配對t檢驗。 實驗結(jié)果: 1．肝臟組織病理學(xué)改變： 光鏡下觀察：酒精組4周末出現(xiàn)肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松，肝細(xì)胞腫脹呈氣球樣變，伴有肝細(xì)胞壞死及炎性細(xì)胞浸潤；12周末出現(xiàn)脂肪變加重，肝細(xì)胞壞死增多，炎細(xì)胞浸潤明顯；KX I組8周末時出現(xiàn)輕度脂肪變，肝細(xì)胞壞死及炎性細(xì)胞浸潤均不明顯。 2．肝組織TNF-α、PAI-1免疫組化染色結(jié)果： TNF-α、PAI-1的陽性表達(dá)主要位于肝臟中央靜脈周圍細(xì)胞的胞漿中。正常

6、組TNF-α、PAI-1基本不表達(dá)，隨著造模時間的延長，酒精組TNF-α、PAI-1的表達(dá)呈進(jìn)行性的增加；KXI組隨著給藥時間的延長，TNF-α、PAI-1的表達(dá)同酒精組相比有所減弱，與酒精組比較有顯著性的差異。 結(jié)論: 1．酒精性肝病過程中，TNF-α、PAI-1的陽性表達(dá)主要位于肝臟中央靜脈周圍細(xì)胞的胞漿中．隨著造模時間的延長，TNF-α、PAI-1的陽性表達(dá)進(jìn)行性增強。 2．抗纖復(fù)方I號能抑制TNF-α、P