室內(nèi)人工飼養(yǎng)中華蜜蜂技術(shù)及卵顯微注射ECFP基因的研究.pdf

1、中華蜜蜂(ApisceranaceranaFabricius，簡(jiǎn)稱中蜂)是我國(guó)寶貴的蜂種資源。中蜂卵和幼蟲的室內(nèi)人工飼養(yǎng)至今尚未成功。建立完整的室內(nèi)人工飼養(yǎng)中蜂卵和幼蟲的技術(shù)體系，是研究中蜂的營(yíng)養(yǎng)需要、生長(zhǎng)發(fā)育及轉(zhuǎn)基因工作的前提；在此基礎(chǔ)上，對(duì)蜜蜂開(kāi)展卵顯微注射轉(zhuǎn)基因研究是利用蜜蜂作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)動(dòng)物藥用蛋白的基礎(chǔ)工作。 本研究以中華蜜蜂卵和幼蟲為研究對(duì)象，以實(shí)驗(yàn)室內(nèi)其正常發(fā)育為目標(biāo)，模擬自然狀況下蜜蜂卵和幼蟲發(fā)育的環(huán)境條件，

2、探索可行的蜜蜂卵和幼蟲的飼養(yǎng)模式；以ECFP基因?yàn)槟康幕?，通過(guò)卵顯微注射方法，將外源基因?qū)朊鄯渎褍?nèi)，嘗試建立蜜蜂卵顯微注射轉(zhuǎn)基因的方法。獲得如下試驗(yàn)結(jié)果： 1.在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)中蜂卵的人工培養(yǎng)。人工培養(yǎng)0-6h之內(nèi)的卵(95％R.H，34℃)，其存活率為11.1％： 2.通過(guò)篩選，獲得了比較理想的中蜂幼蟲同糧營(yíng)養(yǎng)配方，為大規(guī)模進(jìn)行中蜂幼蟲的人工培養(yǎng)提供了營(yíng)養(yǎng)參數(shù)： 3.日轉(zhuǎn)移和不轉(zhuǎn)移兩種移蟲模式下蜜蜂幼

3、蟲化蛹數(shù)差異顯著(p＜0.05)，不轉(zhuǎn)移組較日轉(zhuǎn)移組化蛹率高出12.7％，成活率高出9.7％，說(shuō)明不轉(zhuǎn)移法優(yōu)于日轉(zhuǎn)移幼蟲的移蟲模式： 4.采用單酶切、雙酶切和PCR方法鑒定了分別含有piggyBacORF和目的基因3×P3-ECFP的質(zhì)粒載體pCasper-hs-orf和pXL-BacⅡ-ECFP； 5.利用顯微注射法對(duì)中蜂0～4h卵注射ECFP基因，注射后的卵采取實(shí)驗(yàn)室內(nèi)人工飼養(yǎng)和放入蜂群由護(hù)理蜂照料兩種培養(yǎng)方式，熒光