早期子宮頸鱗癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)因素的研究.pdf

1、研究背景:盡管發(fā)達(dá)國(guó)家子宮頸癌的發(fā)病率明顯下降,但發(fā)展中國(guó)家下降趨勢(shì)卻不明顯,仍足威脅婦女身體健康的主要惡性腫瘤之一.其生物學(xué)行為主要是淋巴轉(zhuǎn)移和直接蔓延,即使非常早期的子宮頸癌也可發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移.淋巴轉(zhuǎn)移不僅是其獨(dú)立的預(yù)后因素,而且還是制定其治療方案的主要參考依據(jù),而治療前盆腔淋巴轉(zhuǎn)移狀態(tài)的評(píng)估目前尚無(wú)理想的手段,這已成為婦科腫瘤工作者的重要課題之一.綜合文獻(xiàn)報(bào)道與早期子宮頸癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)的臨床病理因素有臨床分期、腫塊大小、血清鱗狀

2、細(xì)胞癌抗原水平、組織學(xué)類型、腫瘤細(xì)胞分化、間質(zhì)浸潤(rùn)深度和脈管癌栓等,但各家文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果尚不統(tǒng)一,而且部分高危因素術(shù)前難于得到,故根據(jù)臨床病理特征來(lái)預(yù)測(cè)子宮頸癌患者淋巴轉(zhuǎn)移狀態(tài)尚有困.前哨淋巴結(jié)(sentinellymph node,SLN)活檢術(shù)(sentinel lymph node biopsy,SLNB)可以預(yù)測(cè)早期子宮頸癌患者的盆腔淋巴結(jié)受侵狀態(tài),顯示了較好的臨床應(yīng)用前景.但由于研究時(shí)間短、對(duì)研究病例仍需長(zhǎng)期隨診,存在假陰性和需

3、要良好的檢測(cè)方法、高水平的手術(shù)和病理檢查技術(shù)等限制了其臨床的進(jìn)一步推廣應(yīng)用. 迄今為止,治療前淋巴轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)主要手段目前仍是影像學(xué)檢查.由于CT和MRI只能檢測(cè)直徑lcm以上的淋巴結(jié),且難于區(qū)別淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶和壞死灶及疤痕,因此其敏感性較差.正電子發(fā)射斷層成像(positron emi ssiontomography,PET ) 采用18 - 氟脫氧葡萄糖(flluorine-18-fluoro-2-deoxy-D-ghloose

4、,FDG)作為示蹤劑,已廣泛應(yīng)用于婦科惡性腫瘤的成像,盡管多數(shù)研究顯示FDG-PET判斷子宮頸癌后腹膜淋巴轉(zhuǎn)移的敏感性和特異性均明顯高于 CT 和MRI,但其仍可漏診盆腔微小轉(zhuǎn)移性淋巴病灶,同時(shí)部分患者的治療因FDG-PET的結(jié)果而受到影響.腫瘤轉(zhuǎn)移足癌基因和抑癌基因等多種基因參與調(diào)節(jié)的一個(gè)多步驟、多因素的極其復(fù)雜的過(guò)程,通過(guò)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的過(guò)度表達(dá)以及一系列基因產(chǎn)物的參與,對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移整個(gè)過(guò)程進(jìn)行調(diào)控.基因芯片技術(shù)可同時(shí)對(duì)大量基因的表

5、達(dá)、突變和多態(tài)性進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的檢測(cè),從而達(dá)到高效篩選差異表達(dá)基因的目的.基因芯片技術(shù)為研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的基因開(kāi)關(guān)及表達(dá)程度提供了強(qiáng)有力的工具.利用它,可隨時(shí)獲取腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)各期與腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)基因的表達(dá)模式.基因芯片技術(shù)在腫瘤研究領(lǐng)域中具有非常重要的價(jià)值,可為腫瘤的分了病理診斷、臨床腫瘤預(yù)后的判斷及治療方案的選擇提供了理論指導(dǎo).2001年Hippo首次利用不同轉(zhuǎn)移潛能的胃癌細(xì)胞系,分析全基因表達(dá),顯示其中的差異,發(fā)現(xiàn)12個(gè)基因表達(dá)上

6、調(diào),20個(gè)基因表達(dá)下調(diào),為腫瘤轉(zhuǎn)移研究開(kāi)辟了新的途徑.隨后陸續(xù)報(bào)道了利用基因芯片技術(shù)分析伴與不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移膽管癌、肝癌、口腔癌、胰腺癌、結(jié)腸直腸癌、肺癌等多種組織差異表達(dá)基因的研究.我困香港和新疆學(xué)者等利用基兇芯片技術(shù)對(duì)子宮頸癌組織中差異表達(dá)基因與其發(fā)生發(fā)展進(jìn)行了研究.有關(guān)利用基因芯片技術(shù)篩選子宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的文獻(xiàn)報(bào)道只有一篇,挪威學(xué)者 Lyng 利用基凼芯片技術(shù)篩選了子宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,共篩選出31條差異表達(dá)基因,但其研

7、究對(duì)象包括了晚期的子宮頸癌. 本研究首先擬通過(guò)對(duì)手術(shù)治療的 IB～I(xiàn)IA 期子宮頸鱗癌患者的臨床病理特征、治療前血清SCC-Ag水平和相關(guān)出凝血檢驗(yàn)指標(biāo)與盆腔淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系進(jìn)行單因素和多因素分析,旨在探索早期子宮頸鱗癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移的臨床高危因素.然后擬利用基因芯片技術(shù),以臨床切除的早期子宮頸鱗癌標(biāo)木為研究對(duì)象,篩選早期子宮頸鱗癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,對(duì)表達(dá)差異的基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析;同時(shí)利用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR及west

8、ern blot技術(shù)檢測(cè)了30例早期子宮頸鱗癌組織中部分篩選出的、與盆腔淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因mRNA和蛋白的表達(dá),進(jìn)一步明確這些基因與早期子宮頸鱗癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系.為進(jìn)一步探索正確預(yù)測(cè)早期子宮頸鱗癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移狀態(tài)的腫瘤分子標(biāo)志物奠定實(shí)驗(yàn)依據(jù). 第一部分 早期子宮頸鱗癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)因素的臨床分析 研究目的:探討早期子宮頸鱗癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移的臨床高危因素. 材料與方法:回顧性分析了2004年2月～2007年1月

9、在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院治療、資料完整的135例ⅠB～ⅡA子宮頸鱗癌患者的臨床病理資料和術(shù)前3天內(nèi)血清鱗狀細(xì)胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag)水平、血漿纖維蛋白原水平、血小板數(shù)量和血紅蛋白水平,選擇10個(gè)非重復(fù)的特征性因素,包括患者年齡、臨床期別、腫瘤直徑、病理分化程度、深肌層浸潤(rùn)、脈管瘤栓、治療前血清SCC-Ag水平,以及治療前血小板數(shù)景、血漿纖維蛋白原和血紅蛋白水平與盆腔淋

10、巴轉(zhuǎn)移關(guān)系進(jìn)行單因素和多因素分析. 結(jié)論:癌組織中脈管癌栓陽(yáng)性和手術(shù)前血漿纖維蛋白原水平是早期子宮頸鱗癌患者盆腔淋巴轉(zhuǎn)移的獨(dú)立相關(guān)因素. 第二部分:早期子宮頸鱗癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)譜分析 研究目的:利用基因芯片技術(shù)分析伴與不伴盆腔淋巴轉(zhuǎn)移早期子宮頸鱗癌組織中差異表達(dá)基因. 材料與方法:應(yīng)用包含代表人類全基因組47,000個(gè)轉(zhuǎn)錄本、代表了38,500個(gè)明晰的人類基因的Affymetrix U133

11、plus 2.0基因表達(dá)譜芯片,對(duì)4例I B1期子宮頸鱗癌和2例正常子宮頸組織進(jìn)行基囚表達(dá)譜分析,比較組織問(wèn)差異表達(dá)基因. 結(jié)論:早期子宮頸鱗癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是多基因作用的綜合結(jié)果,基因芯片技術(shù)是一項(xiàng)可用于篩選預(yù)測(cè)盆腔淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)基岡的有效方法. 第三部分:早期子宮頸鱗癌中VSNL1、VCAM1、autotaxin、septin 11的表達(dá)及與盆腔淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系 研究目的:檢驗(yàn)經(jīng)基因芯片篩選出的部分基因與早期子宮

12、頸鱗癌盆腔淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系. 材料和方法:選擇經(jīng)基因芯片篩選出的 4 個(gè)表達(dá)差異基因 VCAM1、VSNL、autotaxin、septin 11,采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 及 westerrn blot 驗(yàn)證其在正常子宮頸組織、無(wú)轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)移早期子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)差異. 結(jié)論:1.VCAM1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期子宮頸鱗癌組織中表達(dá)顯著上調(diào),提示VCAM1在促進(jìn)早期子宮頸鱗癌發(fā)生盆腔淋巴轉(zhuǎn)移的過(guò)程中起著重要作2.V