轉(zhuǎn)Nurr1基因的大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化研究.pdf

1、研究背景：帕金森病是中老年常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，主要病理改變是黑質(zhì)多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)元的變性缺失，目前尚無有效的治療方法。細(xì)胞移植治療是比較有前景的治療手段。骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，MSCs)具有多向分化潛能，易于獲得，可自體移植無免疫排斥等特性，被認(rèn)為在帕金森病的細(xì)胞移植治療方面具有一定的應(yīng)用潛力，但如何誘導(dǎo)其向DA能神經(jīng)元表型分化是這一治療手段所面臨的關(guān)鍵技

2、術(shù)問題之一。孤兒核受體Nurrl(nuclearrelatedregulator-1，Nurr1)是類固醇/甲狀腺激素核受體超家族成員的轉(zhuǎn)錄因子，Nurr1能調(diào)節(jié)多巴胺能神經(jīng)元的發(fā)育并維持其表型。Nurr1基因修飾是否具有促進(jìn)MSCs向DA能神經(jīng)元分化的作用報(bào)道較少。 目的：探討Nurr1基因修飾結(jié)合三七總皂甙(tPNS)和維甲酸(RA)的聯(lián)合誘導(dǎo)對MSCs向DA能神經(jīng)元分化的影響。 方法：構(gòu)建pcDNA3.1-hygr

3、o-Nurr1表達(dá)質(zhì)粒，應(yīng)用脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染MSCs，利用細(xì)胞免疫化學(xué)方法檢測Nurr1基因的表達(dá)。對可表達(dá)Nurr1的MSCs，添加tPNS/RA誘導(dǎo)其向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化，免疫組化法檢測分化細(xì)胞的酪氨酸羥化酶(TH)、乙酰膽堿酯酶(AchE)和γ-氨基丁酸(GABA)表達(dá)，并與tPNS/RA組、Nurr1組和對照組比較，觀察Nurr1基因修飾結(jié)合tPNS/RA的聯(lián)合誘導(dǎo)對MSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的影響。

4、 結(jié)果：轉(zhuǎn)染的Nurr1基因在MSCs中表達(dá)。Nurr1基因修飾聯(lián)合tPNS/RA誘導(dǎo)可促進(jìn)MSCs向TH陽性細(xì)胞分化，Nurr1基因修飾+tPNS/RA組TH陽性細(xì)胞比例(20.4％±4.6％)明顯高于tPNS/RA組(5.7％±3.6％)。Nurr1基因修飾減少tPNS/RA誘導(dǎo)分化的AChE陽性細(xì)胞比例,Nurr1+tPNS/RA組和tPNS/RA組的AchE陽性細(xì)胞的比例分別是41.8％±4.8％、50.4％±5.2％。N

5、urr1基因修飾對tPNS/RA誘導(dǎo)向GABA陽性細(xì)胞分化無影響，Nurr1+tPNS/RA組和tPNS/RA組GABA陽性細(xì)胞比例分別是24.1％±3.5％、20.2％±4.9％。單純Nurr1基因修飾在無tPNS/RA誘導(dǎo)條件下對MSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化無影響。 結(jié)論：Nurr1基因修飾可促進(jìn)tPNS/RA誘導(dǎo)MSCs向TH陽性細(xì)胞分化，減少AchE陽性細(xì)胞的比例，對向GABA陽性細(xì)胞分化無影響。Nurr1基因修飾聯(lián)合tP