誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島樣細(xì)胞分化.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島樣細(xì)胞分化姓名：夏鯤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：龐希寧20040401養(yǎng)。1 ．3 免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定C D 4 5 ，C D 9 0 的表達(dá)情況。2 、大鼠胰腺細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定2 ．1 無菌條件下取大鼠胰腺細(xì)胞離心做原代培養(yǎng)2 ．2D T Z 染色法鑒定培養(yǎng)的胰腺細(xì)胞3 、大鼠胰腺細(xì)胞與M S C 共培養(yǎng)誘導(dǎo)M S C 向胰島樣細(xì)胞分化3 ．1 交通分隔培養(yǎng)的

2、方法把胰腺細(xì)胞和M S C 共培養(yǎng)。4 、誘導(dǎo)后胰島樣細(xì)胞的鑒定4 ．1 誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)觀察。4 ．2D T Z 染色鑒定胰島細(xì)胞。4 ．3 R T - P C R 方法鑒定i n s u l i n 的表達(dá)。4 ．4 免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定i n s u l i n 的表達(dá)。4 ．5 免疫熒光方法鑒定i n s u l i n 的表達(dá)。結(jié) 果1 、分離培養(yǎng)鑒定了大鼠骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞，免疫組化C I M 5 ( 一) C D 9 0( +

3、 ) 細(xì)胞的純化均一程度達(dá)到8 0 ％。2 、b F G F 預(yù)誘導(dǎo)M S C 獲得n e s t i n 陽性細(xì)胞。3 、分離培養(yǎng)了大鼠的胰腺細(xì)胞，D T Z 染色大部分細(xì)胞成猩紅色，表明獲得胰島含量相對(duì)較高的細(xì)胞。4 、共培養(yǎng)法誘導(dǎo)M S C 分化為可分泌胰島素的細(xì)胞。誘導(dǎo)后的細(xì)胞形態(tài)由原來的梭形逐漸變?yōu)閳A形，并且少數(shù)成聚集細(xì)胞團(tuán)，呈半懸浮狀態(tài)，D T Z 染色呈現(xiàn)特異的猩紅色，R T —P C R 檢測(cè)到P D X - 1 ，i