中斷大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的正常誘導分化后的細胞惡變研究.pdf

1、腫瘤干細胞與干細胞的相似特性提示腫瘤干細胞可能來源于異常的干細胞，這種異?？赡馨l(fā)生在干細胞的正常分化過程中，即“成熟阻滯假說”。以此為基礎(chǔ)，本研究選用大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞BMSCs為研究對象，建立BMSCs向神經(jīng)細胞、脂肪細胞和成骨細胞的分化模型，在各組誘導分化的不同時間點撤去誘導劑后正常培養(yǎng)。之后對各組細胞進行細胞的分化特性分析和細胞的惡性轉(zhuǎn)變分析研究。具體方法如下:
　　1.采用全骨髓貼壁篩選法分離大鼠BMSCs進行體外培養(yǎng)與

2、擴增。
　　2.采用β-巰基乙醇誘導BMSCs向神經(jīng)細胞分化，并分別在8h、24h、40h、56h和72h撤去誘導劑;采用胰島素、吲哚美辛和地塞米松聯(lián)合誘導BMSCs向脂肪細胞分化，并分別在1d、3d、5d、7d和9d撤去誘導劑;采用地塞米松、抗壞血酸和β-甘油磷酸鈉同時誘導BMSCs向成骨細胞分化，并分別在1d、3.5d、6d、8d和10.5d撤去誘導劑。觀察細胞的形態(tài)和分化特性。
　　3.采用軟瓊脂集落形成實驗分離具有克

3、隆形成能力的各組中斷誘導的細胞，并對其進行細胞病理學HE染色鑒定和CTX免疫抑制小鼠成瘤實驗。對接種中斷誘導的細胞的組織石蠟包埋切片后進行組織病理學HE染色和抗體免疫組化染色分析。
　　研究結(jié)果如下:
　　1、分離大鼠BMSCs，并在體外增殖培養(yǎng)。
　　2、成功誘導大鼠BMSCs向神經(jīng)細胞、脂肪細胞和成骨細胞的分化，也得到了表達一定分化特性的各組中斷分化細胞。
　　3、各組中斷分化細胞在軟瓊脂集落形成實驗中表現(xiàn)出