中斷大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的正常誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞惡變研究.pdf

1、腫瘤干細(xì)胞與干細(xì)胞的相似特性提示腫瘤干細(xì)胞可能來源于異常的干細(xì)胞，這種異常可能發(fā)生在干細(xì)胞的正常分化過程中，即“成熟阻滯假說”。以此為基礎(chǔ)，本研究選用大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCs為研究對象，建立BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞的分化模型，在各組誘導(dǎo)分化的不同時間點撤去誘導(dǎo)劑后正常培養(yǎng)。之后對各組細(xì)胞進行細(xì)胞的分化特性分析和細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)變分析研究。具體方法如下:
　　1.采用全骨髓貼壁篩選法分離大鼠BMSCs進行體外培養(yǎng)與

2、擴增。
　　2.采用β-巰基乙醇誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化，并分別在8h、24h、40h、56h和72h撤去誘導(dǎo)劑;采用胰島素、吲哚美辛和地塞米松聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs向脂肪細(xì)胞分化，并分別在1d、3d、5d、7d和9d撤去誘導(dǎo)劑;采用地塞米松、抗壞血酸和β-甘油磷酸鈉同時誘導(dǎo)BMSCs向成骨細(xì)胞分化，并分別在1d、3.5d、6d、8d和10.5d撤去誘導(dǎo)劑。觀察細(xì)胞的形態(tài)和分化特性。
　　3.采用軟瓊脂集落形成實驗分離具有克

3、隆形成能力的各組中斷誘導(dǎo)的細(xì)胞，并對其進行細(xì)胞病理學(xué)HE染色鑒定和CTX免疫抑制小鼠成瘤實驗。對接種中斷誘導(dǎo)的細(xì)胞的組織石蠟包埋切片后進行組織病理學(xué)HE染色和抗體免疫組化染色分析。
　　研究結(jié)果如下:
　　1、分離大鼠BMSCs，并在體外增殖培養(yǎng)。
　　2、成功誘導(dǎo)大鼠BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞的分化，也得到了表達(dá)一定分化特性的各組中斷分化細(xì)胞。
　　3、各組中斷分化細(xì)胞在軟瓊脂集落形成實驗中表現(xiàn)出