馬勃培養(yǎng)特性、總生物堿含量及體外抑菌活性的研究.pdf

1、馬勃是較常用的傳統(tǒng)藥用真菌，廣泛分布于世界各地。中國藥典(2005年版)收載的馬勃主要為脫皮馬勃(Lasiosphaera fenzlii Reich)，大馬勃[Calvatia gigantean(Batsch ex Pers.)Lloyd]或紫色馬勃[C. lilacina(Mont.et Berk.)Lloyd]的干燥子實(shí)體。 脫皮馬勃具有消腫、解毒和止血的功用，臨床主要用于治療呼吸道感染所引起的咽喉腫痛、扁桃體炎、咳嗽等

2、癥狀，也可外用于治療瘡癰、褥瘡、凍瘡及創(chuàng)傷出血等。褐孢大禿馬勃[C. saccata(Vahl：Fr.)Morg]、黑鉛色灰球菌(Bovista nigrescens Pers.)、大口靜灰球(Bovistella sinensis Lloyd)和灰包菇[Secotium agaricoides(Czern.)Hollos]這四種腹菌綱真菌在我國部分地區(qū)也被作為馬勃入藥，但尚未被中國藥典所收載。 據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)記載，褐孢大禿馬勃幼時

3、可食用；黑鉛色灰球菌的孢子粉可作為傷口藥使用；大口靜灰球和灰包菇與脫皮馬勃具有相同的藥用功效，特別是大口靜灰球在吉林、江蘇、湖北、江西、福建等多個省市的眾多中醫(yī)門診中被廣泛地作為馬勃入藥，用于治療咳血、創(chuàng)傷出血和扁桃體炎等。 我國馬勃資源豐富，藥用歷史悠久，民間和臨床使用較廣泛，開發(fā)利用的潛力巨大，值得對其進(jìn)一步研究與探討。本論文對鑒定的灰包菇[Secotium agaricoides(czem.)Hollos]，脫皮馬勃(L.

4、fenzlii)，褐孢大禿馬勃[C.saccata(Vahl：Fr.)Morg]，大口靜灰球(Bovistella sinensis Lloyd)和黑鉛色灰球菌(Bovista nigrescens Pers.)5種馬勃的菌絲體培養(yǎng)特性及體外抑菌活性進(jìn)行研究，并對大口靜灰球子實(shí)體的總生物堿進(jìn)行提取和含量測定，以期為馬勃的優(yōu)質(zhì)培育與資源開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)采用固體培養(yǎng)方法分別研究單因子碳源、氮源、維生素、pH值、溫

5、度和光照對以上5種馬勃菌絲體固體培養(yǎng)特性的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別篩選出適合以上5種馬勃生長的最佳營養(yǎng)成分和最佳培養(yǎng)條件，根據(jù)單因子實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)L16(45)，篩選出適合灰包菇和大口靜灰球菌絲體生長的最佳培養(yǎng)基配方；另外采用液體培養(yǎng)方法對5種馬勃液體培養(yǎng)基中碳源、氮源、初始pH值，液體接種量和培養(yǎng)條件進(jìn)行研究，篩選出適合5種馬勃液體發(fā)酵的最佳營養(yǎng)成分和最佳培養(yǎng)條件，從而為5種馬勃菌種的優(yōu)質(zhì)培育和實(shí)現(xiàn)其人工栽培提供理論依據(jù)。 對

6、大口靜灰球總生物堿的提取方法進(jìn)行比較研究，采用酸水提取法提取大口靜灰球子實(shí)體并收集酸水提取液，經(jīng)732型陽離子交換樹脂吸附總生物堿后，使用732型陽離子交換樹脂柱洗脫純化法、靜置提取純化法、熱回流提取純化法和索氏提取純化法該樹脂進(jìn)行洗脫純化，獲得較純的總生物堿，通過稱重法和酸性染料比色法對不同提取方法獲得的總生物堿含量進(jìn)行測定。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，使用732型陽離子交換樹脂柱洗脫純化法獲得的總生物堿最多，總生物堿含量達(dá)2.68％，其

7、次依次是熱回流提取純化法獲得1.13％、索氏提取純化法獲得0.52％和靜置提取純化法獲得0.47％。此外，采用二苯碳酰二肼分光光度法對脫皮馬勃孢子粉水提液中Cr6+的含量進(jìn)行測定，結(jié)果顯示其中Cr6+含量為0.1206～0.2956mg/L。 采用菌餅法(活菌活性測定)和紙片擴(kuò)散法研究了5種馬勃的發(fā)酵液、菌絲體水提液、活菌菌餅以及大口靜灰球子實(shí)體6種溶劑提取液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、黑曲霉和綠色木霉5種測