荷葉生物堿單體的分離鑒定及其抑菌活性研究.pdf

1、荷葉是一種既是食品又是藥品的天然植物原料，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)生物堿是荷葉的主要生理活性成分之一，具有降脂減肥、抑菌、抗氧化、抗病毒等藥理活性。本文采用正交實驗和響應(yīng)面分析方法，分別對超臨界CO2流體萃取技術(shù)和超聲波輔助提取法提取荷葉總生物堿的工藝進行了優(yōu)化；通過高速逆流色譜(HSCCC)和制備液相(Pre-HPLC)聯(lián)用分離、制備得到4種荷葉生物堿單體，并對其進行了結(jié)構(gòu)鑒定；評價了荷葉總生物堿及4種單體的抑菌活性，并對其構(gòu)效關(guān)系進行了初步

2、分析，為荷葉作為天然防腐劑及其功能食品的開發(fā)提供理論基礎(chǔ)和實踐依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 (1)確定了超臨界CO2流體萃取技術(shù)提取荷葉總生物堿的最佳工藝條件。以萃取溫度、萃取壓力、夾帶劑流速、萃取時間為工藝參數(shù)，通過單因素試驗和正交試驗相結(jié)合的方法，確定了超臨界CO2流體萃取荷葉總生物堿的最佳工藝：萃取溫度55℃，萃取壓力20 MPa，夾帶劑流速0.2 mL/min，萃取時間2 h。各因素影響荷葉總生物堿得率的順序為：萃取溫

3、度>萃取時間>萃取壓力>夾帶劑流速。最佳工藝驗證試驗的荷葉總生物堿得率為318.45μg/g。
　　 (2)優(yōu)化了荷葉總生物堿的超聲波提取工藝。在單因素試驗基礎(chǔ)上，選擇液固比、超聲功率和乙醇濃度為自變量，荷葉總生物堿得率為響應(yīng)值，采用Box-Behnken試驗設(shè)計方法，研究各自變量及其交互作用對荷葉總生物堿得率的影響。利用Design Expert7.0軟件得到回歸方程的預(yù)測模型并進行響應(yīng)面分析，確定超聲波提取荷葉總生物堿的最佳

4、工藝為：液固比43 mL/g、超聲功率410 W和乙醇濃度76％，在此條件下，荷葉總生物堿得率為326.08μg/g。
　　 (3)以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5:5:6:4，v/v/v/v)為溶劑體系，采用高速逆流色譜(HSCCC)對荷葉總生物堿進行分離，得到的組分經(jīng)制備液相進一步分離后，得到4種生物堿單體，經(jīng)HPLC面積歸一法分析，純度分別達到91.25％、96％、97.13％和99.3％，通過紫外光譜、質(zhì)譜等技術(shù)鑒定，分

5、別為巴婆堿(asimilobine)、O-去甲基荷葉堿(O-nornuciferine)、N-去甲基荷葉堿(N-nornuciferine)和荷葉堿(nuciferine)。
　　 (4)采用牛津杯法研究了荷葉總生物堿及4種單體的抑菌作用。結(jié)果表明：荷葉總生物堿及4種單體對三種供試細菌(金黃色葡萄球菌、單增李斯特菌和大腸桿菌)都有明顯的抑制作用，最低抑菌濃度(MIC)在50-200μg/mL，其中O-去甲基荷葉堿對金黃色葡萄球菌