馬鈴薯α-茄堿對灰葡萄孢菌的體外抑菌活性研究.pdf

1、本試驗用0.5％的硫酸浸提和28％的氨水沉淀的方法從馬鈴薯皮中提取糖苷生物堿(TGA)，并采用柱層析和薄層層析的方法純化分離出α-茄堿(α-solanine)，以α-茄堿為試驗材料，灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)為供試菌種，采用平板涂布法測定α-茄堿對灰葡萄孢菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MFC)，菌絲生長速率法測定抑制率和半數(shù)效應(yīng)濃度(EC50)。并通過牛津杯法研究了α-茄堿體外抑制灰葡萄孢菌的影響因素（p

2、H值、熱處理、金屬鹽），在此基礎(chǔ)上對α-茄堿的抑菌機制和機理進行初步研究。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)試驗采用0.5％的硫酸浸提和28％的氨水沉淀的方法從馬鈴薯皮中提取糖苷生物堿，得粗樣質(zhì)量為1.38mg/g。通過薄層層析法(展開劑為氯仿-甲醇-2％氨水(70∶30∶5，v/v)，顯色劑為5％的硫酸乙醇液）鑒定，以硅膠為吸附劑，乙酸乙酯-95％乙醇-10％氨水(80∶30∶4，v/v)洗脫部位得到α-茄堿單體，α-茄堿的Rf值為

3、0.38（與標(biāo)準(zhǔn)品一致）。洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得α-茄堿。
　　(2)采用平板涂布法測定α-茄堿對灰葡萄孢菌的MIC是12.5μmol/L，MFC是18.75μmol/L。通過菌絲生長速率法測定α-茄堿對灰葡萄孢菌的抑制率及EC50值，得出:α-茄堿濃度為18.75時，其對灰葡萄孢菌的抑制率達到93.24％，α-茄堿的EC50值為7.241μmol/L。
　　(3)采用牛津杯法測定不同濃度的α-茄堿對灰葡萄孢菌的體外抑制效果，結(jié)果

4、表明:當(dāng)α-茄堿的濃度為50μmol/L時，其對灰葡萄孢菌表現(xiàn)出高度敏感性，且隨著α-茄堿濃度的增加，敏感度增加。故本試驗選取50μmol/L為α-茄堿對灰葡萄孢菌的最適抑菌濃度。在最適濃度下研究α-茄堿的抑菌活性受到pH、熱處理溫度和時間、金屬鹽的影響。當(dāng)α-茄堿溶液的pH值為7時，對灰葡萄孢菌的抑制效果最好;對α-茄堿進行熱處理會影響其對灰葡萄孢菌的抑制效果，當(dāng)加熱溫度不超過80℃時，其抑菌效果具有良好的穩(wěn)定性，尤其當(dāng)溫度不超過60

5、℃時，隨著加熱時間的延長，其抑菌圈直徑變化小于1 mm;當(dāng)加熱溫度升至80℃，其抑菌圈直徑隨溫度增加和時間延長而縮小;濃度為0.25％、0.5％、1％、2％和3％的NaCl、MgSO4、CaCl2和KCl均能加強α-茄堿對灰葡萄孢菌的抑制效果，且在此濃度范圍內(nèi)隨金屬鹽濃度增大，α-茄堿的抑菌直徑增大，效果增強。
　　(4)由α-茄堿對灰葡萄孢菌作用后的轉(zhuǎn)移實驗得出結(jié)論:α-茄堿對灰葡萄孢菌的作用方式與它的濃度和作用時間有關(guān)，6.2

6、5μmol/L和12.5μmol/L的α-茄堿與灰葡萄孢菌接觸3d，對其起僅抑制作用;6.25μmol/L和12.5μmol/L的α-茄堿與灰葡萄孢菌接觸6d、12d和18.75μmol/L的α-茄堿與灰葡萄孢菌接觸3d、6d、12d，對其均有殺滅作用。通過對不同濃度的α-茄堿對灰葡萄孢菌孢子抑制的速率和持續(xù)時間的測定得出結(jié)論:18.75μmol/L和25μmol/L的α-茄堿對灰葡萄孢菌孢子的殺滅時間分別為10h和8h。在含有不同濃度