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文檔簡介
1、目的:結(jié)直腸癌(大腸癌,colorectalcarcinoma,CRC)是常見的危害人類健康的消化道惡性腫瘤之一,自1975年以來,其發(fā)病率一直保持較強(qiáng)勁的上升勢頭,且近年來年輕化趨勢明顯。雖然,流行病學(xué)調(diào)查表明,高脂肪食物和纖維不足是發(fā)病的主要誘因之一,但同其他腫瘤一樣,結(jié)直腸癌的確切發(fā)病機(jī)制尚不十分明確?,F(xiàn)代分子生物學(xué)研究表明,腫瘤的發(fā)生不僅是細(xì)胞增殖過度和分化異常性疾病,而且也是細(xì)胞凋亡減少性疾病。增殖細(xì)胞核抗原(prolifer
2、ationcellnuclearantigen,PCNA)只在增殖細(xì)胞中合成,其合成與表達(dá)和細(xì)胞增殖周期相關(guān),是細(xì)胞增殖狀態(tài)的一種標(biāo)記。B細(xì)胞淋巴瘤白血病2基因(B-celllymphoma-leukemia-2,Bcl-2)是一種公認(rèn)的細(xì)胞凋亡拮抗基因,能阻止細(xì)胞的凋亡,增加細(xì)胞的累積率,與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。新生血管可為腫瘤提供營養(yǎng)物質(zhì),也是腫瘤播散轉(zhuǎn)移的前提,同時刺激腫瘤生長。因此新生血管形成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。
3、以往的研究提示PCNA、Bcl-2和微血管密度(MicrovesselDensity,MVD)三者與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展可能存在較為密切的關(guān)系,但仍存在爭論,特別是尚未見聯(lián)合研究的報道,不清楚它們?nèi)咧g的具體相互關(guān)系及在大腸癌的生物學(xué)行為中扮演的角色。本試驗擬用組織芯片技術(shù)/組織微列陣(tissuechips/tissuemicroarrays,TMAs)和免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)的方法研究PCN
4、A、Bcl-2和MVD在不同分化程度結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況;探討其在結(jié)直腸癌臨床及結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用;探討PCNA、Bcl-2和MVD三者間的相互關(guān)系;并進(jìn)一步探討組織芯片技術(shù)應(yīng)用的可行性。 方法:選取收集病例資料保存完整、首次發(fā)病,術(shù)前未接受任何放射治療、化學(xué)治療、中藥治療及免疫治療等輔助治療的結(jié)直腸組織手術(shù)切除標(biāo)本,共80例,其中,男性41例,女性39例;年齡在24~85歲之間,小于40歲10例,40歲至60歲29例,
5、60歲及以上41例,中位數(shù)年齡61.5歲,平均年齡59.3歲;本資料中按照分化程度分:正常對照組10例,不典型增生組10例,高分化腺癌組20例,中分化腺癌組20例,低分化腺癌組20例;Duke's分期:A期7例,B期37例,C期14例,D期2例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例。應(yīng)用組織芯片技術(shù)構(gòu)建兩個6×7孔的組織芯片蠟塊,組織芯直徑1.5mm。組織芯片切片行HE染色與常規(guī)切片相比較,考察其可觀察程度。采用免疫組織化學(xué)EnVis
6、on法、鏈霉卵白素-生物素-過氧化酶連接法(streptavidin-biotin-oeroxidaseconjugatedmethod,SP法)檢測結(jié)直腸組織中PCNA、Bcl-2和MVD的表達(dá)水平(本課題選用特異性血管內(nèi)皮標(biāo)志物CD34作為結(jié)直腸癌微血管內(nèi)皮的標(biāo)志物,進(jìn)行MVD的檢測),進(jìn)而采用Spearman's等級相關(guān)分析法分析它們?nèi)咧g的相關(guān)性,并分析它們?nèi)吲c結(jié)直腸癌的臨床病理特征間的關(guān)系。全部數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計
7、軟件協(xié)助處理。 結(jié)果:1)組織芯片蠟塊中的組織芯排列整齊,無碎裂,無移位,切片后檢查見無組織芯脫失,少量的組織芯發(fā)生皺縮和部分脫失,4例/總芯片80例占5%。HE染色光鏡觀察可見組織學(xué)類型仍具代表性,與普通切片相比較可觀察程度一致。 2)CD34-MVD在不同結(jié)直腸組織中的表達(dá)規(guī)律是,結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)最高,但各分化程度之間的差別不是太明顯(尤其是在高分化與中分化組之間,無明顯的統(tǒng)計學(xué)差異,P>0.05),不典型增生組
8、織中逐漸降低,正常結(jié)直腸組織中表達(dá)最低,總的組間差異有顯著性(P=0.000<0.01)。 3)PCNA在不同結(jié)直腸組織中的表達(dá)規(guī)律與CD34-MVD的表達(dá)有相似性,結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)最高,并且分化程度越差其表達(dá)越高(但各分化程度間的統(tǒng)計學(xué)差異不顯著,P>0.05),不典型增生組織中逐漸降低,正常結(jié)直腸組織中表達(dá)最低,總的組間差異有顯著性(P=0.000<0.01)。 4)Bcl-2的表達(dá)規(guī)律與CD34-MVD、PCN
9、A的表達(dá)不同,結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)較低(并且分化程度越差其表達(dá)越低,其中低分化腺癌幾乎不表達(dá)),不典型增生組織中表達(dá)最高,正常結(jié)直腸組織中表達(dá)比高分化和不典型增生組略低。總體組間差異亦有顯著性(P=0.005<0.01)。 5)CD34-MVD、PCNA、Bcl-2在結(jié)直腸組織中的表達(dá)在不同性別組、不同年齡組、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和不同Duke's分期之間均無顯著性差異(P>0.05)。 6)CD34-MVD與PCNA的表達(dá)
10、呈正相關(guān),rs=0.623(P=0.000<0.01),而與Bcl-2的表達(dá)不相關(guān)(P>0.05);另,PCNA與Bcl-2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),rs=-0.233(P0.038<0.05),提示其相關(guān)程度不強(qiáng)。而CD34-MVD、PCNA與分化程度呈正相關(guān),rs分別為0.647、0.774(P=0.000<0.01),Bcl-2與分化程度呈負(fù)相關(guān),rs=-0.412,(P=0.000<0.01)。 結(jié)論:1)組織芯片技術(shù)在檢測腫瘤標(biāo)
11、志物并用于早期診斷中具有其他組織病理學(xué)技術(shù)不可替代的高效、省時、低消耗的優(yōu)點,在腫瘤病理學(xué)診斷和研究領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。 2)PCNA、Bcl-2和MVD在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與患者的年齡、性別、Duke's分期、腫瘤轉(zhuǎn)移情況方面區(qū)別無臨床意義。 3)PCNA參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展的始終,與結(jié)直腸癌分化程度密切相關(guān),具有一定的診斷價值和判斷預(yù)后的價值。 4)Bcl-2可能通過加強(qiáng)對細(xì)胞凋亡的抑制而在結(jié)直腸
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