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文檔簡介
1、大量研究表明,腫瘤的發(fā)生發(fā)展和細胞增殖與凋亡之間的動態(tài)平衡受到破壞有關。Bcl-2家族蛋白是重要的細胞凋亡調節(jié)因子,它們中有些能抑制細胞凋亡(如Bcl-2、Bcl-XL),而另外一些則會促進凋亡(如Bax、Bak),因此它們表達的改變將直接影響著腫瘤細胞凋亡的敏感性。結直腸癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一,最近流行病學資料顯示其發(fā)病率正呈逐年上升趨勢,因此檢測Bcl-2家族在結直腸癌中的表達并研究其作用將為結直腸癌的化學治療和基因治療提供新
2、的依據。 本課題采用RT-PCR法對40例新鮮結直腸癌手術標本中的癌組織及癌旁組織的Bcl-2、Bcl-XL和Bax進行了mRNA水平檢測,結果采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理,癌組織與癌旁組織間表達的比較用Wilcoxon符號秩檢驗,與臨床病理相關因素的關系,采用Kruskal-Wallis檢驗,結果顯示:結直腸癌組織和癌旁組織的Bcl-2mRNA表達水平均較低,大部分標本檢測不到或只有很弱的條帶,兩者之間表達無顯著差異;所有
3、標本均能檢測到Bcl-XLmRNA表達,且癌組織明顯高于癌旁組織(P=0.01);BaxmRNA表達水平較Bcl-2、Bcl-XL高,但癌組織和癌旁組織間表達無顯著差異。癌組織和癌旁組織問Bcl-2/Bax和Bcl-XL/Bax的比值亦無顯著差異,而且三個基因在癌組織的mRNA水平均與臨床病理相關因素(性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、淋巴結轉移、Dukes分期)無關。同時為了解它們的蛋白水平,本課題采用免疫組化MaxVision二步法檢
4、測了上述40例結直腸癌組織和癌旁組織及33例存檔結直腸癌蠟塊中Bcl-2、Bcl-XL和Bax蛋白的表達情況,后者己獲隨訪資料,免疫組化結果用等級評分法評定,結果癌組織與癌旁組織間表達的比較用Wilcoxon符號秩檢驗,與臨床病理相關因素的關系用χ2檢驗,生存分析用COX比例風險回歸模型,生存曲線用Kaplan-Meier檢驗。結果如下:73例結直腸癌組織和40例癌旁組織中,Bcl-2蛋白表達較弱,總陽性率分別為50.7%(37/73)
5、、47.5%(19/40);Bcl-XL蛋白表達較強,總陽性率分別為82.2%(60/73)、70.0%(28/40);Bax蛋白表達最強,總陽性率分別為87.3%(64/73)、80%(32/40)。只有Bcl-XL蛋白的表達癌組織明顯高于癌旁組織,兩者之間的差異具有顯著性意義(P=0.002),Bcl-2蛋白的表達與淋巴結轉移和Dukes分期成負相關(P=0.037、0.022),并且是影響總生存時間和無瘤生存時間的危險因素(P=0
6、.011、0.033,RR=2.11、1.935,95%CI1.184-3.762、1.056-3.544),Bcl-2蛋白表達陰性者生存率低于陽性表達者(P=0.0226),其他都與臨床病理相關因素和預后無關?;谏鲜鼋Y果,為探討特異性下調Bcl-XL誘導人結腸癌細胞系凋亡的作用,本課題最后采用人結腸癌細胞株DLD1,利用人工合成的Bcl-XL靶向的小分子干擾RNA(siRNA)下調Bcl-XL蛋白,通過Westernblot法檢測處
7、理后Bcl-XL蛋白的表達情況,流式細胞儀檢測處理后細胞的凋亡情況,臺盼藍染色法計數(shù)存活細胞,結果采用t檢驗。結果顯示:與對照組相比,轉染Bcl-XLsiRNA組的Bcl-XL蛋白表達顯著性下降,凋亡細胞的數(shù)量顯著增加(P<0.05),細胞存活率顯著降低(P<0.05)。 從上述實驗結果得出以下主要結論:(1)在結直腸癌中,Bcl-XL的蛋白和mRNA表達均明顯強于Bcl-2,說明Bcl-XL可能起著更為重要的作用,同時可能是潛
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