東鄉(xiāng)野生稻中OsAPX1基因鑒定與功能初步分析.pdf

1、水稻是我國(guó)乃至全世界重要的糧食作物，也是功能基因研究的重要模式植物。東鄉(xiāng)野生稻是目前世界上分布最北抗寒能力最強(qiáng)的普通野生稻，尤其在幼苗、抽穗期能長(zhǎng)期抗低溫逆境脅迫。因此發(fā)掘一些與東鄉(xiāng)野生稻抗冷相關(guān)的新基因，深入了解它們的抗寒機(jī)制，對(duì)提高水稻作物對(duì)低溫的抗逆境能力，改良水稻品種和品質(zhì)具有重要的實(shí)際意義。
　　本研究通過(guò)生物信息學(xué)方法和分子生物技術(shù)手段分析，從東鄉(xiāng)野生稻冬季宿根cDNA文庫(kù)中篩選鑒定OsAPX1基因的序列特征、染色體定

2、位、啟動(dòng)子順式元件分析以及分析OsAPX1蛋白的理化性質(zhì)、三維結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)域和功能預(yù)測(cè)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和驗(yàn)證，成功的對(duì)OsAPX1基因進(jìn)行了原核表達(dá)，蛋白質(zhì)提取與純化以及不同時(shí)期及不同組織中OsAPX1基因表達(dá)分析和不同非生物脅迫下OsAPX1基因表達(dá)分析。本課題研究取得如下研究成果：
　　1.成功地從東鄉(xiāng)野生稻宿根cDNA文庫(kù)中篩選出編碼抗壞血酸過(guò)氧化物酶基因OsAPX1，ORF全長(zhǎng)750bp，與普通水稻高達(dá)99％的同源性。

3、　　2.將擴(kuò)增得到的目的基因OsAPX1與載體pET28連接并轉(zhuǎn)化到宿主菌DH5α中，構(gòu)建pET28a-APX1重組載體，分析表明目的基因按正確的ORF插入到載體中。
　　3.篩選克隆宿主菌DH5α中陽(yáng)性重組載體轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌BL21。篩選出陽(yáng)性重組菌，用IPTG誘導(dǎo)，過(guò)表達(dá)的蛋白用SDS—PAGE電泳分析表明OsAPX1在大腸桿菌BL21中成功的表達(dá)，蛋白質(zhì)相對(duì)分子量約為27kDa。
　　4.經(jīng)過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件后，得到含量