孔雀魚蛋白質(zhì)感染因子蛋白基因的克隆及功能分析.pdf

1、蛋白質(zhì)感染因子(proteinaceous infectious agents，Prions)是蛋白本質(zhì)、導(dǎo)致傳染性海綿樣腦病(transmissible spongiform encephalopathies，TSE)的致病因子，一般指感染因子蛋白(Prion Protein，PrP)的凝聚體。蛋白質(zhì)感染因子蛋白種類多，物種分布廣。魚類也可能通過飼料蛋白形成魚類Prions和魚類TSE。因此以重要的實(shí)驗(yàn)室魚類孔雀魚為研究對(duì)象，對(duì)蛋白質(zhì)

2、感染因子蛋白基因的結(jié)構(gòu)、組織表達(dá)及在不同濃度的鹽水中此基因表達(dá)情況進(jìn)行了研究，取得以下結(jié)果： 克隆孔雀魚蛋白質(zhì)感染因子蛋白基因，獲得孔雀魚prpc基因序列。包括基因全長(zhǎng)cDNA和對(duì)應(yīng)的基因組DNA片段。cDNA長(zhǎng)2,245bp，其開放閱讀框長(zhǎng)1.545bp，編碼含515個(gè)氨基酸殘基的蛋白。該蛋白具有蛋白質(zhì)感染因子蛋白全部特征結(jié)構(gòu)：信號(hào)肽、基本結(jié)構(gòu)、重復(fù)肽區(qū)域、疏水區(qū)域、二硫鍵、糖基化位點(diǎn)和一個(gè)糖基縮醛磷肌醇位點(diǎn)(GPI)。高級(jí)結(jié)

3、構(gòu)也與已知的其他魚類PrP基本一致。從魚類PrP的進(jìn)化系統(tǒng)樹中可知道，此次獲得的孔雀魚Prpc屬于PrP-1型魚類蛋白質(zhì)感染因子。采用染色體步移獲得孔雀魚Prpc對(duì)應(yīng)的基因組DNA片段，長(zhǎng)3,720bp。在孔雀魚中該基因是由單個(gè)外顯子編碼的，該基因至少包括2個(gè)內(nèi)含子和2個(gè)外顯子。 通過半定量RT-PCR檢測(cè)孔雀魚Prpc基因在各組織當(dāng)中的表達(dá)情況和在不同濃度的鹽水中的表達(dá)情況，結(jié)果表明，孔雀魚PrPc基因在腦、眼、肝胰臟、腸、肌