糖化終末產(chǎn)物受體參與糖尿病視網(wǎng)膜病變機(jī)制及其干預(yù)研究.pdf

1、持續(xù)的高血糖是引起糖尿病并發(fā)癥的一個(gè)重要因素,在高血糖環(huán)境下,還原性糖如葡萄糖與循環(huán)蛋白或結(jié)構(gòu)蛋白通過共價(jià)交聯(lián),發(fā)生非酶糖化作用形成糖化終末產(chǎn)物(Advanced glycation end products,AGEs).這些共價(jià)化合物與組織血液中多種細(xì)胞成份密切相關(guān),其在各種組織蛋白上的過度沉積可引起老齡化和糖尿病的多種并發(fā)癥.糖化終末產(chǎn)物受體(Receptor for advanced glycation end products,

2、RAGE)是近年來被明確稱為細(xì)胞表面分子免疫球蛋白超家族新成員的AGEs的特異性受體,可在多種細(xì)胞表面表達(dá).但是關(guān)于視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞RAGE的表達(dá)尚在研究階段,深入研究RAGE的特性和尋找有效阻斷該受體的方法,有助于系統(tǒng)地探索糖化終末產(chǎn)物參與糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabetic Retinopathy,DR)的病理機(jī)制.該實(shí)驗(yàn)室在前期工作中通過免疫組化觀察到糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管上AGEs的沉積,而且體外孵育的AGE-BSA和A

3、GE-RSA能夠誘導(dǎo)正常大鼠發(fā)生類糖尿病視網(wǎng)膜血管病變的發(fā)生.該研究應(yīng)用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞的原代培養(yǎng),觀察微血管細(xì)胞上RAGE的表達(dá)以及針對(duì)RAGE序列的反義寡核苷酸的干預(yù)作用;并同時(shí)觀察了糖尿病病程的延長(zhǎng),體內(nèi)RAGEmRNA表達(dá)的變化以及氨基胍是否具有干預(yù)作用.第一部分:糖化終末產(chǎn)物受體參與糖尿病視網(wǎng)膜病變機(jī)制的研究.第二部分:反義寡核苷酸抑制糖化終末產(chǎn)物誘導(dǎo)的受體表達(dá).針對(duì)牛RAGE基因mRNA序列的+

4、13bp~+30bp的18個(gè)堿基互補(bǔ)序列合成RAGE反義寡核苷酸.利用熒光顯微鏡的FITC通道,觀察5'-FAM標(biāo)記的硫代磷酸修飾型RAGE反義寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)復(fù)合物(RAGE-ASODN),經(jīng)陽離子脂質(zhì)體(cationic liposome,CL)分導(dǎo)轉(zhuǎn)染后,在牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(BREC)和周細(xì)胞(BRP)中的時(shí)相分布.15min即可見5'-FAM標(biāo)記的修飾型A