胰島素對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，在發(fā)達(dá)國家DR致盲已經(jīng)位居致盲性眼病的前列。在我國，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活水平的提高，DR的患病率正迅速升高。DR的防治已成為我國現(xiàn)階段眼科醫(yī)生和流行病專家共同的重要任務(wù)。 高血糖是引起DR的主要因素。血糖的控制對(duì)于DR及其原發(fā)病糖尿病的治療都是重中之重。胰島素是最常用的控制血糖的藥物，臨床上發(fā)現(xiàn)胰島素在控制全身血糖的同時(shí)，其加強(qiáng)治療導(dǎo)致1型和2型糖尿病患者視網(wǎng)膜病變的短暫惡化。流

2、行病學(xué)上，胰島素治療已成為DR進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。其中的機(jī)制不明。最新研究報(bào)道胰島素誘導(dǎo)患者網(wǎng)膜血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)升高導(dǎo)致血視網(wǎng)膜屏障破壞從而參與糖尿病視網(wǎng)膜病變的進(jìn)程。 本研究為了了解胰島素在正常糖和高糖環(huán)境下對(duì)視網(wǎng)膜VEGF表達(dá)的影響及其機(jī)制，聯(lián)合進(jìn)行體外和體內(nèi)研究，體外研究通過體外培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(BREC)，探索正常糖(5mM)和高糖(30mM)環(huán)境下胰島素對(duì)BREC生長的影響，活性氧產(chǎn)生、凋亡

3、的影響；VEGFmRNA和蛋白表達(dá)的影響及其信號(hào)機(jī)制；體內(nèi)研究采用鏈尿佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病SD大鼠，探索胰島素作用于正常檸檬酸緩沖液對(duì)照SD大鼠和STZ誘導(dǎo)的糖尿病SD大鼠后VEGFmRNA和蛋白表達(dá)的影響。VEGFmRNA通過Realtime-PCR檢測；VEGF蛋白通過免疫組化、Westernblot、HUVEC增殖實(shí)驗(yàn)等方法檢測；ROS通過特異性熒光燃料H2DCFDA聯(lián)合激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀觀察；細(xì)胞凋亡則通過熒光

4、燃料AnnexinV和PI聯(lián)合流式細(xì)胞儀觀察。 結(jié)果表明：在正常糖濃度下，胰島素在體內(nèi)和體外均顯著上調(diào)VEGFmRNA和蛋白的水平。然而在高糖濃度下，胰島素在體內(nèi)和體外都并不能顯著上調(diào)VEGFmRNA和蛋白的水平。高糖下胰島素主要通過PI-3K信號(hào)通路誘導(dǎo)VEGF的表達(dá)。在體外，胰島素在正常糖和高糖下均能顯著提高BREC活性氧的產(chǎn)生，并且胰島素聯(lián)合高糖作用后產(chǎn)生ROS顯著高于胰島素或高糖的單獨(dú)作用。胰島素在正常糖和高糖濃度下都能