地塞米松與伏隔核腺苷受體在丙泊酚精神依賴中的作用.pdf

1、目的:1、利用大鼠靜脈內(nèi)自身給藥方法建立丙泊酚依賴大鼠模型。模型訓(xùn)練成功后，研究腹腔給予地塞米松(DEX)對(duì)大鼠丙泊酚自身給藥行為的作用;2、利用腦室立體定位法伏隔核給予腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)小發(fā)夾RNA干擾（AAV-shRNAi）抑制腺苷A2A受體表達(dá)，研究伏隔核內(nèi)腺苷A2A受體對(duì)丙泊酚依賴大鼠覓藥行為及復(fù)吸的影響，從而探討丙泊酚成癮神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制，為臨床戒毒治療及其預(yù)防提供新的理論依據(jù)。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)一:清潔級(jí)雄性S

2、D大鼠，周齡14-15周，體重280-320g。戊巴比妥鈉麻醉后，右側(cè)頸外靜脈置管，置管后緩慢注射10萬(wàn)U青霉素抗感染，傷口用阿米卡星注射液處理，單籠飼養(yǎng)，恢復(fù)7天后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)期。實(shí)驗(yàn)籠內(nèi)設(shè)有有效鼻觸開(kāi)關(guān)和無(wú)效鼻觸開(kāi)關(guān)，大鼠鼻觸一次有效開(kāi)關(guān)獲得一次丙泊酚注射，鼻觸無(wú)效開(kāi)關(guān)則不注射丙泊酚。在注射開(kāi)始后30s內(nèi)大鼠如果再次鼻觸有效開(kāi)關(guān)則不能再獲得藥物，此時(shí)僅記錄鼻觸反應(yīng)次數(shù)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程由計(jì)算機(jī)控制，每天訓(xùn)練限定最高注射次數(shù)100次。記錄大鼠

3、的有效鼻觸、無(wú)效鼻觸和藥物注射次數(shù)。用丙泊酚(1.70mg/kg3h·d)自身給藥連續(xù)訓(xùn)練14天后，將丙泊酚依賴大鼠隨機(jī)分成4組(n=6)，于訓(xùn)練前1h分別腹腔注射不同劑量DEX(0.01，0.03和0.1mg/kg)或?qū)φ杖軇?，觀察藥物對(duì)大鼠自身給藥行為活動(dòng)的影響，并檢測(cè)大鼠伏隔核(NAc)內(nèi)多巴胺D1受體(D1R)的水平變化。
　　應(yīng)用固定程序(FR1)建立大鼠自身給予蔗糖模型，訓(xùn)練時(shí)間為7天。實(shí)驗(yàn)由計(jì)算機(jī)自動(dòng)記錄有效鼻觸次數(shù)

4、、無(wú)效鼻觸次數(shù)和蔗糖顆粒數(shù)。訓(xùn)練時(shí)，大鼠每次鼻觸有效開(kāi)關(guān)都得到一顆蔗糖顆粒，鼻觸無(wú)效開(kāi)關(guān)時(shí)則不給蔗糖顆粒。模型穩(wěn)定后，大鼠腹腔注射不同劑量DEX(0.01，0.03和0.1mg/kg)或溶劑，觀察其對(duì)大鼠自身給予蔗糖行為的影響。
　　在每個(gè)自發(fā)活動(dòng)檢測(cè)箱子中各放入一只大鼠，可以自由活動(dòng)。由攝像跟蹤系統(tǒng)自動(dòng)記錄大鼠的自發(fā)活動(dòng)（水平運(yùn)動(dòng)距離）。待大鼠適應(yīng)環(huán)境1h后，分別腹腔注射DEX(0.01，0.03和0.1mg/kg)或溶劑，給藥

5、1h后放回箱底，測(cè)試并記錄其在3h內(nèi)的自發(fā)活動(dòng)度。
　　實(shí)驗(yàn)二:清潔級(jí)雄性SD大鼠16只，體重250～300g，年齡12周，隨機(jī)分為2組:伏隔核腺苷A2A受體干擾組（AAV-shA2AR），隨機(jī)序列對(duì)照組（AAV-shCTRL組），麻醉后，中樞立體定位大鼠雙側(cè)伏隔核(NAc)，連接微量注射泵，以0.05ul/min注射給予腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的腺苷A2A受體干擾(AAV-shA2AR)或腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的隨機(jī)序列干擾(AAV-shCTRL

6、)，每側(cè)共給藥500nl，恢復(fù)2周后，右側(cè)頸外靜脈置管，注射青霉素100000U抗感染，再恢復(fù)7天后，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)期，訓(xùn)練結(jié)束后單籠飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)籠內(nèi)設(shè)有有效鼻觸和無(wú)效鼻觸開(kāi)關(guān)，大鼠鼻觸一次有效開(kāi)關(guān)注射一次丙泊酚，鼻觸無(wú)效開(kāi)關(guān)則不注射丙泊酚。在注射開(kāi)始后30s內(nèi)大鼠如果再次鼻觸有效開(kāi)關(guān)則不能再獲得藥物，此時(shí)僅記錄鼻觸反應(yīng)次數(shù)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程由計(jì)算機(jī)控制，每天訓(xùn)練限定最高注射次數(shù)100次。記錄大鼠的有效鼻觸、無(wú)效鼻觸和藥物注射次數(shù):(1)觀察兩組大

7、鼠在自身給藥模型建立期間行為區(qū)別;(2)觀察兩組大鼠在戒斷14天后給予藥物相關(guān)環(huán)境線索誘導(dǎo)的復(fù)吸行為的不同。
　　結(jié)果:
　　實(shí)驗(yàn)一：
　　1、與對(duì)照組相比，腹腔注射DEX(0.1mg/kg)組大鼠的有效鼻觸次數(shù)顯著降低（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、與對(duì)照組相比，DEX(0.01，0.03和0.1mg/kg)組大鼠NAc中多巴胺D1受體表達(dá)水平均明顯下降（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

8、　　3、DEX不同劑量對(duì)大鼠自身給予蔗糖行為沒(méi)有明顯影響（P＞0.05），各組之間的有效鼻觸次數(shù)和無(wú)效鼻觸次數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、與對(duì)照組相比，不同劑量組動(dòng)物表現(xiàn)出的自發(fā)活動(dòng)度無(wú)明顯改變（P＞0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　實(shí)驗(yàn)二：
　　1、在大鼠丙泊酚依賴模型建立期間，與AAV-shCTRL組相比，AAV-shA2AR組大鼠有效鼻觸次數(shù)和無(wú)效鼻觸次數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2、與AAV-

9、shCTRL組相比，AAV-shA2AR組大鼠能夠增加環(huán)境線索誘導(dǎo)的復(fù)吸行為，有效鼻觸次數(shù)顯著增加(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1、DEX可以有效抑制大鼠丙泊酚自身給藥行為，其作用機(jī)制可能是通過(guò)影響伏隔核內(nèi)多巴胺D1受體表達(dá)，從而參與介導(dǎo)了丙泊酚自身給藥行為。
　　2、伏隔核內(nèi)腺苷A2A受體表達(dá)抑制對(duì)丙泊酚依賴大鼠的模型建立沒(méi)有影響，但能顯著增加丙泊酚復(fù)吸行為，伏隔核內(nèi)腺苷A2A受體介導(dǎo)了丙泊酚