武夷名叢離體培養(yǎng)及其內(nèi)源激素變化分析.pdf

1、本研究以武夷名叢中的早生種金鳳凰、中生種金鎖匙以及晚生種肉桂的成年莖段為材料，對武夷名叢的離體培養(yǎng)進(jìn)行了研究，建立了武夷名叢的無菌系，并對其無菌芽苗進(jìn)行增殖、生根研究，比較3個品種間的差異，同時還探討了提取測定茶葉內(nèi)源激素的一些基本條件參數(shù)，并對外植體以及離體培養(yǎng)過程中的培養(yǎng)物進(jìn)行內(nèi)源激素的HPLC分析，最后對離體培養(yǎng)前后的材料進(jìn)行RAPD分析檢測其遺傳變異性。主要研究結(jié)果如下： 1、武夷名叢成年材料離體培養(yǎng)研究。試驗(yàn)比較了不同

2、消毒方法、不同切割方式以及光照強(qiáng)度、不同的生長素種類、GA3濃度、不同的激素水平以及鹽和糖的濃度等因素對武夷名叢腋芽誘導(dǎo)的影響，此外，還比較了不同激素水平對增殖的影響以及不同鹽濃度和生長素種類對生根的影響。結(jié)果表明：以取春季以及一芽二葉時期二葉位的莖段材料為接種外植體最為合適；用0.1％升汞消毒劑浸泡9～11min為最佳消毒方法，但應(yīng)視不同品種以及老嫩度而定，將肉桂接種于MS+2.0 mg·L-1BA+0.5 mg·L-1IAA+0.5

3、 mg·L-1GA3中適合其啟動培養(yǎng)；用培養(yǎng)基1/2MS+1.0～1.5 mg·L-1BA+0.2～0.8 mg·L-1IAA+0.2 mg·L-1 GA3繼代培養(yǎng)武夷名叢可以達(dá)到一定的增殖效果，金鳳凰在培養(yǎng)基中的適應(yīng)能力比金鎖匙和肉桂好；培養(yǎng)基1/4MS+4mg·L-1NAA中含低礦質(zhì)鹽濃度和較高的生長素，有利于生根。本試驗(yàn)通過增殖培養(yǎng)，平均增殖系數(shù)為3，可以預(yù)計(jì)在這個培養(yǎng)體系情況下，一年內(nèi)從一個腋芽可以增殖培養(yǎng)729個腋芽，這在茶葉

4、生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景。 2、武夷名叢茶樹內(nèi)源激素變化的HPLC研究。(1)茶葉內(nèi)源激素的檢測，結(jié)果表明：GA3、IAA選擇波長分別為207 nm和280 nm，ABA、ZT選擇波長分別為280 nm和254nm；用于GA3分析的流動相為甲醇-乙-KH2PO3緩沖液系統(tǒng)(15:15:70，v/v，pH 3.5)；用于檢測IAA和ABA的流動相為甲醇-乙腈-KH2PO3緩沖液系統(tǒng)(20:20:60，v/v，pH 3.5)：用于檢

5、測Zeatin的流動相為甲醇-乙腈-磷酸緩沖液系統(tǒng)(15:15:70，v/v，pH 7.0)；(2)武夷名叢茶樹外植體與試管苗的內(nèi)源激素的測定，結(jié)果表明：品種(系)間的內(nèi)源激素含量及含量變化幅度差異可能與其遺傳特性有關(guān)，GA3是茶樹生長發(fā)育不可缺少的內(nèi)源激素之一；肉桂品種不同生長時期二葉位葉片以及同一生長時期不同部位的葉片含量，以二葉位的新梢生長旺盛，內(nèi)源激素變化幅度比較大，春季是促進(jìn)芽苗生長的最合適的季節(jié)。添加了外源激素BA、IAA、

6、GA3情況下茶葉芽苗增殖的效果比無添加任何激素的茶葉芽苗效果好，內(nèi)源IAA和ZT的含量上升了，但是GA3的含量反而逐漸下降，在整個離體培養(yǎng)過程中ABA的含量變化不大。 3、武夷名叢試管苗遺傳穩(wěn)定性的RAPD檢測.結(jié)果表明：肉桂品種離體培養(yǎng)前后存在變異，但變異率僅為4.13％，從生產(chǎn)角度考慮，在田間存在4.13％的變異植株并不影響茶葉產(chǎn)品的品質(zhì)。因此離體培養(yǎng)材料選用莖切段分生組織比較合理。同時發(fā)現(xiàn)，組培苗的純度更高，且外植體和試管