中藥雞血藤組織培養(yǎng)及內源激素變化的研究.pdf

1、雞血藤（Millettia reticuiata Benth.）是豆科(Fabaceae)密花豆屬（Spatholobussuberectus）植物，中藥雞血藤為豆科植物密花豆（Spatholobus suberectus Dunn）的干燥藤莖。作為一味傳統(tǒng)中藥，其具有活血補血，調經止痛，舒筋活絡等功效。現(xiàn)代藥理學研究表明，雞血藤具有改善血液系統(tǒng)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、雙向調節(jié)酪氨酸酶和舒緩心血管的作用，并對免疫調節(jié)、保肝護肝、抗炎鎮(zhèn)

2、痛、鎮(zhèn)靜催眠等均具有良好療效。近年來，隨著藥用雞血藤需求量的日趨增加，但正品雞血藤野生資源量反而呈急劇下降，漸趨緊缺狀態(tài)，再加上雞血藤生長慢，人工種植少，這勢必會影響我國雞血藤的用藥需求。利用植物組織培養(yǎng)技術來快速繁殖再生植株，對雞血藤種質資源的保護和擴大雞血藤的人工栽培規(guī)模具有非常重要的推動作用，也為滿足藥用雞血藤的市場需求提供了有力保障。本文以人工栽培的藥用雞血藤為材料，開展了愈傷組織誘導、增殖和分化不定芽的研究，對雞血藤再生植株過

3、程的諸多影響因素進行了篩選，同時對雞血藤愈傷組織誘導和分化過程中4種內源激素IAA、ABA、ZT、GA3水平進行了檢測和分析，并進一步對愈傷組織分化過程中內外源激素的相互效應進行了探討，以期為雞血藤優(yōu)良種質資源的保存和快速繁育以及后續(xù)的細胞分子育種提供參考，主要結果如下:
　　1、獲得了雞血藤組織培養(yǎng)外植體的最佳消毒方法。嫩葉無菌處理方法為:75％酒精浸泡20s+0.1％升汞處理5min，該條件下外植體成活率達到91.7％;嫩莖為

4、:75％酒精浸泡10s+0.2％的升汞處理5min，此條件下外植體成活率達到88.3％;嫩根為:75％酒精處理20s+0.1％的升汞處理5min，此條件下嫩根成活率高達95％。
　　2、獲得了雞血藤愈傷組織誘導的最適外植體和培養(yǎng)基。愈傷組織誘導最適外植體為嫩葉，最適培養(yǎng)基為MS+6-BA0.9 mg/L+ NAA0.5 mg/L+KT0.2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂8g/L，誘導率為88.3％。
　　3、得到愈傷組織增殖

5、的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA0.9 mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.1 mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂8g/L，增殖系數(shù)達到4.59。
　　4、雞血藤愈傷組織分化不定芽的最適培養(yǎng)基為:MS+6-BA2.5 mg/L+ NAA0.4 mg/L+GA31.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂8g/L，分化率為88.33％;組培苗最適生根培養(yǎng)基為:1/2MS+ NAA0.1 mg/L+IBA0.5mg/L+瓊脂8.0g/L+蔗糖30

6、g/L，生根率為81.67％。
　　5、在愈傷組織的誘導階段，內源IAA始終處于較高水平，并在愈傷組織生長最旺時達最大，而內源ABA、ZT和GA3一直保持在較低水平，IAA/ABA比值對愈傷組織的誘導與生長有著重要的調節(jié)作用。
　　6、在愈傷組織分化階段，內源IAA水平先下降后上升，分化成芽期達到最高，且高于愈傷組織誘導期，介于1.15-1.87μg/g之間;ZT和ABA的含量均呈先升后降趨勢，而GA3則一直呈上升趨勢;IA