福建朱砂根離體培養(yǎng)及RAPD分析.pdf

1、本研究以福建朱砂根優(yōu)良單株的成年莖段和種胚為材料，進行了朱砂根成年材料的離體繁殖、愈傷組織培養(yǎng)和細(xì)胞懸浮培養(yǎng)等研究，并對朱砂根試管苗及其愈傷組織進行了解剖學(xué)觀察；同時，利用RAPD技術(shù)進行了福建鼓山朱砂根野生群體的遺傳多樣性分析以及福建武平人工栽培的3種類型朱砂根實生群體的聚類分析。主要研究結(jié)果如下： 1．福建朱砂根原變種(AG)、變種紅涼傘(AP)以及二者中間過渡類型(AGR)成年材料的離體繁殖研究 試驗結(jié)果表明：較適

2、合成年綠葉朱砂根(AG)的啟動培養(yǎng)基為：1/2MS或WPM+1～5mg/LBA+0.1mg/LNAA+0.2～0.5mg/LGA；較適合成年紫背朱砂根(AP)的啟動培養(yǎng)基為：1/2MS+1～5mg/LBA+0.1mg/LNAA+0.2 mg/LGA：而對于成年綠葉紅心朱砂根(AGR)，較適合的啟動培養(yǎng)基則為：1/2MS+1m·L<'-1>BA+0.1mg/LNAA+0.2～0.5mg/LGA。用培養(yǎng)基MS+3mg/LKT+0.01mg/

3、LNAA+0.5mg/LGA繼代培養(yǎng)各種類型的朱砂根芽苗可以達到一定的增殖效果。朱砂根芽苗在降低了無機鹽濃度的增殖培養(yǎng)基上就可以完成了壯苗和生根的過程，在適當(dāng)提高生長素濃度、降低分裂素濃度的培養(yǎng)基上生根效果更好。 2．朱砂根兩種成熟度的胚培養(yǎng)及無菌苗各部分(葉片、莖段、胚軸和胚根)的愈傷組織培養(yǎng)研究 試驗結(jié)果表明：從較成熟的果實剝離的種胚比幼嫩的果實中剝離的種胚更容易誘導(dǎo)愈傷的產(chǎn)生：胚培養(yǎng)產(chǎn)生的幼苗的各個部分在MS+0.

4、5mg/L2，4-D+0.01mg/LKT培養(yǎng)基中均能誘導(dǎo)出愈傷組織，其中胚根的愈傷組織誘導(dǎo)率最高：同時，胚根誘導(dǎo)出的白色冰砂狀愈傷組織，在MS+0.5mg/L2,4-D+0.01 mg/LKT，隔代添加5 mg/LAgNO<,3>的培養(yǎng)基上可以很好的繼代保持，并保持旺盛的增殖能力。白色冰砂狀愈傷組織在不同培養(yǎng)基的長期培養(yǎng)過程中，逐漸出現(xiàn)了其它四種類型的愈傷組織：白色濕軟狀、淡黃色顆粒狀、黃綠色塊狀和綠色塊狀愈傷組織。 3．朱砂

5、根愈傷組織分化根的研究 試驗結(jié)果表明：以降低了無機鹽濃度的1/2MS為基本培養(yǎng)基，不添加任何激素，附加3％蔗糖就可以使淡黃色顆粒狀的朱砂根愈傷組織分化叢狀根：MS+0.1mg/L2，4-D+5.0mg/LKT+100mg/L肌醇+4％蔗糖+3％甘露醇+5％椰汁的培養(yǎng)基中根分化率最高，但所需時間也較長：弱光有利于朱砂根愈傷組織根的分化。 4．朱砂根的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)研究 采用5種不同類型愈傷組織(Ⅰ-白色濕軟狀、Ⅱ-白

6、色冰砂狀、Ⅲ-淡黃色顆粒狀、Ⅳ-黃綠色塊狀和Ⅴ-色塊狀)作為起始材料，在去除了瓊脂的MS+0.5mg/L2,4-D+0.01mg/LKT液體培養(yǎng)基中進行懸浮培養(yǎng)。結(jié)果表明：Ⅱ、Ⅲ類型愈傷組織較易建立懸浮細(xì)胞系：蔗糖是朱砂根愈傷組織建立懸浮細(xì)胞系的理想碳源。 5．朱砂根瘤狀苗和不同類型愈傷組織的石蠟切片觀察 觀察結(jié)果表明：瘤狀苗生長點的結(jié)構(gòu)與正常苗的不同。自然生長情況下，瘤狀苗生長點內(nèi)部細(xì)胞快速分裂，無法突破木栓化嚴(yán)重的外

7、層細(xì)胞形成芽原基：離體培養(yǎng)條件下，瘤狀苗生長點細(xì)胞不正?？焖俜至?，有的雖沒有外層木栓化細(xì)胞的束縛，但也沒有結(jié)構(gòu)上的分化。另外，不同類型愈傷組織在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上也存在漸進性，愈傷組織分化根屬于外起源。 6．福建鼓山野生朱砂根群體中23份資源的遺傳多樣性分析 分析結(jié)果表明：朱砂根鼓山群體的有效等位基因數(shù)Ne為1.4233，Nei氏基因多樣度H為0.2524，平均等位基因數(shù)Na為1.8060，Shannon多樣性指數(shù)I為0.385

8、2，說明福建鼓山朱砂根群體具有較高的遺傳多樣性；同時，供試的23份朱砂根資源在遺傳上有著較高的相似系數(shù)，又證明了它們之間在遺傳上保持著較高的穩(wěn)定性。 7．福建武平實生朱砂根3個主要類型15份朱砂根資源的聚類分析 分析結(jié)果表明：當(dāng)以結(jié)合距離D=0.598為界時，本研究把15份朱砂根資源分為三大類：第一類為綠葉類，第二類為紅心綠葉類，第三類為紫背類，其中紅心綠葉類與綠葉類之間的遺傳距離要比與紫背類之間的遺傳距離近；而當(dāng)以結(jié)合