鱖消化系統(tǒng)器官發(fā)生的組織學(xué)及胃蛋白酶原基因的克隆.pdf

1、利用形態(tài)學(xué)觀察和連續(xù)組織切片技術(shù)，對出膜后0～35d的鱖(Siniperca chuatsi)仔稚魚消化系統(tǒng)胚后發(fā)育的組織學(xué)特征進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明，試驗(yàn)水溫為18.0-20.0°C時(shí)，鱖初孵仔魚消化道僅為一段位于脊索下方、卵黃囊上方的實(shí)心細(xì)胞索，卵黃囊呈橢圓形，含有油球。孵化后第2天，口和肛門形成，消化道貫通。孵化后第4天，消化道上皮細(xì)胞出現(xiàn)分化，肝臟和胰臟出現(xiàn)，仔魚開始由內(nèi)源性營養(yǎng)向外源性營養(yǎng)轉(zhuǎn)變。孵化后第5天，仔魚開口攝食，消

2、化道分化成口咽腔、食道、胃、前腸和后腸。孵化后第9天，卵黃囊完全被吸收。此后隨著魚體的生長，消化系統(tǒng)從結(jié)構(gòu)和功能上逐步地發(fā)育完善和成熟。孵化后第7天前腸中出現(xiàn)空泡，孵化后第8天仔魚后腸中發(fā)現(xiàn)有嗜曙紅顆粒，表明腸上皮細(xì)胞吸收了脂肪和蛋白質(zhì)。在孵化后第13天，出現(xiàn)胃腺，標(biāo)志著稚魚期的開始。 胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前體，是胃里具有消化功能的蛋白酶原，屬于天冬氨酸蛋白酶家族。脊椎動物胃蛋白酶原一般在胃粘膜中合成，在酸性條件下轉(zhuǎn)變成有活性

3、的胃蛋白酶。鱖為典型的肉食性魚類，自開食起終生以活魚蝦為食，為了解鱖胃蛋白酶原基因的分子特征，利用RT-PCR和cDNA末端快速擴(kuò)增法(RACE)克隆了鱖胃蛋白酶原基因cDNA全長序列，并對該基因的結(jié)構(gòu)特征和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，鱖胃蛋白酶原基因cDNA序列全長1367bp，5’端非翻譯區(qū)43 bp，3’端非翻譯區(qū)187 bp，開放閱讀框(ORF)1137 bp，共編碼378個(gè)氨基酸。鱖胃蛋白酶原氨基末端存在信號肽和激活肽序

4、列，序列中含有催化活性必需的2個(gè)天冬氨酸殘基和構(gòu)成二硫鍵的6個(gè)半胱氨酸殘基。鱖胃蛋白酶原氨基酸序列與其他脊椎動物胃蛋白酶原氨基酸序列的同源性為42.9％～87.3％，表明胃蛋白酶原基因在脊椎動物的長期進(jìn)化中比較保守。鱖與其他脊椎動物胃蛋白酶原氨基酸序列的NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹表明：除了美洲紅點(diǎn)鮭和斜帶石斑魚的C型胃蛋白酶原屬C型外，其他魚類的胃蛋白酶原單獨(dú)聚為一支，其中鱖胃蛋白酶原與美洲黃蓋碟胃蛋白酶原AIIa的親緣關(guān)系最近，推測本研究獲得的胃